[发明专利]一种突变体核酸文库构建方法及得到的突变体核酸文库在审
| 申请号： | 201711099850.1 | 申请日： | 2017-11-09 |
| 公开（公告）号： | CN109763172A | 公开（公告）日： | 2019-05-17 |
| 发明（设计）人： | 翟莉莉;章文蔚;王林;董宇亮;郑越;刘芬 | 申请（专利权）人： | 深圳华大生命科学研究院 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C40B40/06 |
| 代理公司： | 深圳鼎合诚知识产权代理有限公司 44281 | 代理人： | 孙银行;彭家恩 |
| 地址： | 518083 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 一种突变体核酸文库构建方法及得到的突变体核酸文库，所述方法包括：将切刻内切酶的切刻位点序列插入环状双链核酸中，形成带有切刻位点的环状双链核酸；使用第一切刻内切酶和核酸外切酶切刻、消化带有切刻位点的环状双链核酸的第一条链；在聚合酶的作用下，以第二条链为模板，在含有突变位点的引物的存在下进行引物延伸反应，然后在连接酶的作用下将合成的突变体链两端连接；使用第二切刻内切酶和核酸外切酶切刻、消化上一步产物中的第二条链，得到单链环状突变体链；和以单链环状突变体链为模板进行滚环扩增，得到突变体核酸文库。本发明的方法具有无偏性、高通量、高效性和简单易行的优势。 | ||
| 搜索关键词： | 突变体核酸 双链核酸 内切酶 突变体 文库 核酸外切酶 第二条链 文库构建 单链环 位点 引物延伸反应 消化 第一条链 滚环扩增 突变位点 位点序列 高通量 高效性 聚合酶 连接酶 引物 合成 | ||
【主权项】：
1.一种突变体核酸文库构建方法，其特征在于，所述方法包括：（1）将切刻内切酶的切刻位点序列插入环状双链核酸中，形成带有切刻位点的环状双链核酸；（2）使用第一切刻内切酶和核酸外切酶切刻、消化所述带有切刻位点的环状双链核酸的第一条链；（3）在聚合酶的作用下，以第二条链为模板，在含有突变位点的引物的存在下进行引物延伸反应，然后在连接酶的作用下将合成的突变体链两端连接；（4）使用第二切刻内切酶和核酸外切酶切刻、消化步骤（3）产物中的所述第二条链，得到单链环状突变体链；优先地，所述的突变体核酸文库构建方法还包括步骤（5）：以步骤（4）所得的单链环状突变体链为模板进行滚环扩增，得到所述突变体核酸文库。
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