[发明专利]一种中药组合物中八种成分的分离方法

摘要

本发明提供一种中药组合物的8种化合物的分离方法，发明人对于本发明药物组合物的化学成分进行了深入研究，分离得到8个化合物，分别为10‑O‑(p‑hydroxycinnamoyl)‑adoxosidic acid(1)、芦荟大黄素‑8‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷(2)、槲皮苷(3)、matairesinol‑4'‑O‑glucoside(4)、芹糖甘草苷(5)、epi‑vogeloside(6)、vogeloside(7)、咖啡酸乙酯(8)，为本发明药物组合物的质量控制提供了一种新的方法。

主权项

1.一种中药组合物中八种成分的分离方法，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：连翘200‑300 、麻黄60‑100 、大黄40‑60 、鱼腥草200‑300、金银花200‑300 、板蓝根200‑300、广藿香60‑100、绵马贯众200‑300、红景天60‑100、薄荷脑5‑9、苦杏仁60‑100 、甘草60‑100 、石膏200‑300，其特征在于，所述分离方法包括以下步骤：（1）该中药组合物总浸膏，经AB‑8大孔树脂吸附，依次用水、10 %乙醇、30 %乙醇、50 %乙醇洗脱，分别收集各部分洗脱液，浓缩后得到各部位浸膏；（2）取步骤（1）得到的50 %乙醇洗脱部位浸膏，加入反相硅胶ODS‑AQ‑HG，待拌样自然晾干后，上样，利用反相ODS‑AQ‑HG开放柱分离，依次用甲醇‑水体积比为20:80、40:60、60:40、80:20及100 %甲醇进行洗脱，顺序得到Fr. A‑Fr. E；（3）取步骤（2）得到的Fr. A样品，加入反相硅胶ODS‑AQ‑HG拌样，待拌样ODS自然晾干后，将拌样ODS加入到上样柱内，上中压制备液相进行分离 ，中压制备液相梯度分离，甲醇‑水体积比为25:75~60:40，流速：25 mL/min，以500 mL等体积接收流份于锥形瓶中，减压浓缩，经薄层层析板检识合并流份并再次减压浓缩，得到Fr. A‑1 ~ Fr. A‑7；（4）取步骤（3）得到的Fr. A‑2样品与硅胶拌样，上硅胶柱，用二氯甲烷‑甲醇体积比为8:1等度分离，以50 mL等体积接收流份，洗脱体积为800 mL，薄层层析板检识合并流份得到Fr. A‑1‑1~ Fr. A‑1‑4；（5）取步骤（4）得到的Fr. A‑1‑2样品用甲醇溶解，采用高效液相色谱法，流动相甲醇‑水体积比为50:50，流速：12 ml/min，检测波长：210 nm，进行初步分离，分别收集保留时间为6‑8 min，9‑10 min，12‑13 min的色谱峰，并减压回收溶剂，分别进行以下分离：6‑8 min色谱峰，经高效液相色谱法进一步纯化，流动相：乙腈‑水, 25:75，流速：12 ml/min，检测波长210 nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间8‑9 min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物2：芦荟大黄素‑8‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷；9‑10 min色谱峰，经高效液相色谱进一步纯化，流动相：甲醇‑水 45:55，流速：12 ml/min，检测波长210 nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间21‑23 min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物3：槲皮苷；10‑12 min色谱峰，经高效液相色谱进一步纯化，流动相：乙腈‑水25:75，流速：12 ml/min，检测波长210 nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间9‑10 min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物4：罗汉松脂酚‑4'‑O‑β‑D‑葡萄糖苷；（6）取步骤（4）得到的Fr. A‑1‑3样品用甲醇溶解，采用高效液相色谱法，流动相甲醇‑水体积比为30:70，流速：12 ml/min，检测波长：210 nm，进行初步分离，分别收集保留时间为10‑11 min，17‑19 min，21‑24 min的色谱峰，并减压回收溶剂，17‑19 min为化合物6：表断马钱子甙半缩醛内酯，21‑24 min为化合物7：断马钱子甙半缩醛内酯，10‑11 min色谱峰，经高效液相色谱进一步纯化，流动相：乙腈‑水 15:85，流速：12 ml/min，检测波长210 nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间14‑16 min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物5：芹糖甘草苷；（7）取步骤（3）得到的Fr. A‑3样品用甲醇溶解，采用高效液相色谱法，流动相为甲醇‑水体积比60:40，流速：12 ml/min，检测波长：210 nm，进行初步分离，分别收集保留时间为14‑15 min，19‑21 min的色谱峰，并减压回收溶剂，19‑21 min的色谱峰收集液在二氯甲烷‑甲醇溶液体积比为2:1中析出白色沉淀，得到化合物8；14‑15 min色谱峰经高效液相色谱进一步纯化，流动相：乙腈‑水 30:70，流速：12 ml/min，检测波长210 nm，色谱柱：YMC‑Pack R&D ODS‑A，250×20 mm，S‑10 μm，在此条件下收集保留时间18‑20 min的色谱峰，减压回收溶剂后，得到化合物1：10‑O‑(p‑hydroxycinnamoyl)‑adoxosidic acid。