[发明专利]心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测体系及试剂盒

摘要

本发明公开了心血管疾病个性化用药相关基因多态性检测体系及试剂盒。本体系涉及定量荧光PCR扩增(Quantitive Fluorescent PCR，QF‑PCR)技术和毛细管电泳检测技术。该体系的特点：1、通过多重PCR，实现一管式扩增17个基因上的27个多态性位点。2、检测结果可实现对抗高血压药、抗血小板药和口服抗凝药、调血脂药等常用药物使用提供参考。3、本体系可以实现血液、血卡样本的直接扩增，免除了提取DNA的步骤；4、本体系可整合UDG‑dUTP防污染措施，可以有效防止产物污染。本发明的优点是检测位点覆盖全面、特异性高、灵敏度高、可靠性强、操作简便、实用性强、成本低，具备大批量检测的能力。

主权项

一种用于检测心血管个性化用药指导的基因检测的PCR体系引物组合物，在该同一PCR体系中能同时对以下21个位点进行扩增：ACE基因I/D位点、ADRB1基因1165G>C位点、ALDH2基因1510G>A位点、ApoE基因388T>C位点、ApoE基因526C>T位点、CYP2C19*2基因681G>A位点、CYP2C19*3基因636G>A位点、CYP2C19*17基因‑806C>T位点、CYP3A5*3基因219‑237G>A位点、CYP4F2*3基因1297G>A位点、MTHFR基因1286A>C位点、MTRR基因66A>G位点、SLCO1B1基因521T>C位点、ADRB1基因145A>G位点、AGTR1基因*86A>C位点、CYP2C9*2基因430C>T位点、CYP2C9*3基因1075A>C位点、CYP2D6*10基因100C>T位点、MTHFR基因665C>T位点、SLCO1B1基因388A>G位点、VKORC1基因‑1639G>A位点；所述扩增该位点的引物分别为：ACE基因I/D位点：正向野生型引物：5’‑ACCTGCTGCCTATACAGTCACTTTTA‑3’，正向突变型引物：5’‑GGGATTACAGGCGTGATACAGTC‑3’，反向共用引物：5’‑ATGCCTTGAGCTCCAGCCCTTAGC‑3’；ADRB1基因1165G>C位点：正向野生型引物：5’‑GCGCGCGCAGCAGAGCAGTCC‑3’，正向突变型引物：5’‑GCGCGCGCAGCAGAGCAGTCG‑3’，反向共用引物：5’‑AACGTGGTGAAGGCCTTCCAC‑3’；ALDH2基因1510G>A位点：正向野生型引物：5’‑GTCCCACACTCACAGTTTTCACTTC‑3’，正向突变型引物：5’‑GTCCCACACTCACAGTTTTCACTTT‑3’，反向共用引物：5’‑GGTCCTGGGAGTGTAACCCAT‑3’；ApoE基因388T>C位点：正向野生型引物：5’‑GCGCGGACATGGAGGACGTGT‑3’，正向突变型引物：5’‑GCGCGGACATGGAGGACGTGC‑3’，反向共用引物：5’‑ATGGAGCCCACAGTGGCGG‑3’；ApoE基因526C>T位点：正向野生型引物：5’‑ATGCCGATGACCTGCAGAAGC‑3’，正向突变型引物：5’‑ATGCCGATGACCTGCAGAAGT‑3’，反向共用引物：5’‑ATGGAGCCCACAGTGGCGG‑3’；CYP2C19*2基因681G>A位点：正向野生型引物：5’‑TTTCCCACTATCATTGATTATTTCCCG‑3’，正向突变型引物：5’‑TTTCCCACTATCATTGATTATTTCCCA‑3’，反向共用引物：5’‑AACTAGTCAATGAATCACAGATACGC‑3’；CYP2C19*3基因636G>A位点：正向野生型引物：5’‑ATCAGGATTGTAAGCACCCCCTGG‑3’，正向突变型引物：5’‑ATCAGGATTGTAAGCACCCCCTGA‑3’，反向共用引物：5’‑GATATTCACCCCATGGCTGTCTA‑3’；CYP2C19*17基因‑806C>T位点：正向野生型引物：5’‑GCATTATCTCTTACATCAGAGATG‑3’，正向突变型引物：5’‑GCATTATCTCTTACATCAGAGATA‑3’，反向共用引物：5’‑ATCTCTCGGGCTGTTTTCCTTAGATAA‑3’；CYP3A5*3基因219‑237G>A位点：正向野生型引物：5’‑GGTCCAAACAGGGAAGAGATAC‑3’，正向突变型引物：5’‑GGTCCAAACAGGGAAGAGATAT‑3’，反向共用引物：5’‑ATGGAGAGTGGCATAGGAGA‑3’；CYP4F2*3基因1297G>A位点：正向野生型引物：5’‑GGAACCCATCACAACCCAGCTG‑3’，正向突变型引物：5’‑GGAACCCATCACAACCCAGCTA‑3’，反向共用引物：5’‑ATGGGCCCTGCCGAGAAGGG‑3’；MTHFR基因1286A>C位点：正向野生型引物：5’‑GGGAGGAGCTGACCAGTGAAGA‑3’，正向突变型引物：5’‑GGGAGGAGCTGACCAGTGAAGC‑3’，反向共用引物：5’‑CCAGGTGGAGGTCTCCCAACTT‑3’；MTRR基因66A>G位点：正向野生型引物：5’‑CCATGTACCACAGCTTGCTCACAT‑3’，正向突变型引物：5’‑CCATGTACCACAGCTTGCTCACAC‑3’，反向共用引物：5’‑ATGCCTTGAAGTGATGAGGAG‑3’；SLCO1B1基因521T>C位点：正向野生型引物：5’‑GAATCTGGGTCATACATGTGGATATATGT‑3’，正向突变型引物：5’‑GAATCTGGGTCATACATGTGGATATATGC‑3’，反向共用引物：5’‑TAGACAAAGGGAAAGTGATCATACA‑3’；ADRB1基因145A>G位点：正向野生型引物：5’‑GTTGCTGCCTCCCGCCAGCGAAA‑3’，正向突变型引物：5’‑GTTGCTGCCTCCCGCCAGCGAAG‑3’，反向共用引物：5’‑GCCAGGGACATGATGAAGAGGTT‑3’；AGTR1基因*86A>C位点：正向野生型引物：5’‑AGCACTTCACTACCAAATGAGCA‑3’，正向突变型引物：5’‑AGCACTTCACTACCAAATGAGCC‑3’，反向共用引物：5’‑ACACATTCATCGAGTTTCTGACAT‑3’；CYP2C9*2基因430C>T位点：正向野生型引物：5’‑GGGCTTCCTCTTGAACACG‑3’，正向突变型引物：5’‑GGGCTTCCTCTTGAACACA‑3’，反向共用引物：5’‑GGGAGGATGGAAAACAGAGACTTAC‑3’；CYP2C9*3基因1075A>C位点：正向野生型引物：5’‑GCTGGTGGGGAGAAGGTCAAT‑3’，正向突变型引物：5’‑GCTGGTGGGGAGAAGGTCAAG‑3’，反向共用引物：5’‑AACCATCCTCTCTTTAAGTTTGC‑3’；CYP2D6*10基因100C>T位点：正向野生型引物：5’‑ACGCTGGGCTGCACGCTACC‑3’，正向突变型引物：5’‑ACGCTGGGCTGCACGCTACT‑3’，反向共用引物：5’‑GTAGGGGAGCCTCAGCACCT‑3’；MTHFR基因665C>T位点：正向野生型引物：5’‑AAAGCTGCGTGATGATGAAATCGG‑3’，正向突变型引物：5’‑AAAGCTGCGTGATGATGAAATCGA‑3’，反向共用引物：5’‑GTTGGAAGGTGCAAGATCAGAGCC‑3’；SLCO1B1基因388A>G位点：正向野生型引物：5’‑ACAGGTATTCTAAAGAAACTAATATCA‑3’，正向突变型引物：5’‑ACAGGTATTCTAAAGAAACTAATATCG‑3’，反向共用引物：5’‑ACTTTTCCCACTATCTCAGGTG‑3’；VKORC1基因‑1639G>A位点：正向野生型引物：5’‑GCGTGAGCCACCGCACCC‑3’，正向突变型引物：5’‑GCGTGAGCCACCGCACCT‑3’，反向共用引物：5’‑AGCAGGAGAGGGAAATATC‑3’。