[发明专利]水产养殖池塘中常见微藻的无机氮吸收速率的检测方法

摘要

本发明公开了一种水产养殖池塘中常见微藻的无机氮吸收速率的检测方法，步骤(1)测定一水生经济动物从放苗到收获区间，池塘中无机氮盐NaNO3、NaNO2和NH4Cl的浓度变化范围；(2)根据最小、最大N浓度，设计七个N浓度梯度；(3)以不含氮的湛水107‑13培养液为培养液，按设计，分别用NaNO3、NaNO2和NH4Cl配七个N浓度梯度的培养液，再相应加入15N‑无机氮盐，使15N为N质量的10％，加入实验藻；(4)培养；(5)测微藻重量，测δ15N和微藻中N的重量百分含量；再计算无机氮吸收速率，本发明了解水产品所处的生态环境，能准确了解微藻中氮元素的来源和去向，为水产品生产过程提供依据。

主权项

水产养殖池塘中常见微藻的无机氮吸收速率的检测方法，其特征是包括如下步骤：(1)测定一水生经济动物从放苗到收获区间，池塘中无机氮盐NaNO3、NaNO2和NH4Cl的浓度变化范围；(2)根据步骤(1)获得的最小N浓度和最大N浓度，设计七个N浓度梯度；(3)以不含氮的湛水107‑13培养液为基础培养液，按照步骤(2)的设计，分别以NaNO3、NaNO2和NH4Cl为氮源，配置七个N浓度梯度的培养液，再向各个含NaNO3培养液中加入15N‑NaNO3，使15N添加量为含NaNO3培养液中N质量的10％，向各个含NaNO2培养液中加入15N‑NaNO2，使15N添加量为含NaNO2培养液中N质量的10％，向各个含NH4Cl培养液中加入15N‑NH4Cl，使15N添加量为含NH4Cl培养液中N质量的10％，设置三个平行，再分别加入相同浓度的实验藻；(4)在光照培养箱中培养步骤(3)获得的样品，培养体积为50mL，培养温度为28℃，光照强度为39μmol.m‑2.s‑1，培养时间为4h；(5)用干燥恒重的玻璃纤维滤膜GF/C，分别抽滤步骤(4)获得的藻液，加入10mL去离子水冲洗，取出附有微藻的玻璃纤维滤膜GF/C，对折，60℃烘干、恒重、研磨后用锡纸包裹、冷冻保存，干燥恒重的玻璃纤维滤膜GF/C的重量为重量1；烘干恒重的附有微藻的玻璃纤维滤膜GF/C的重量为重量2，重量2与重量1之差即为所得微藻重量，采用EA‑IRMS系统测定δ15N和微藻中N元素的重量百分含量；(6)由以下公式计算出微藻对无机氮的吸收速率：式①中：V为吸收速率，其单位为：ug·g‑1·h‑1；15Ns为培养后藻类样品的15N丰度，；15Nn为藻样15N的天然丰度，为0.00365；15Nenr为加入示踪剂后培养介质初始的15N丰度，为0.98；T为培养时间，其单位为h；PON为微藻所含的总氮，其单位为ug·g‑1。