[发明专利]一种合成桧烯的基因工程菌及其构建方法与应用有效
| 申请号： | 201711130703.6 | 申请日： | 2017-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN109777745B | 公开（公告）日： | 2020-04-24 |
| 发明（设计）人： | 咸漠;刘丽娟;张海波;黄世永 | 申请（专利权）人： | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12P5/00;C12R1/865 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 邓宇 |
| 地址： | 266101 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 一种合成桧烯的基因工程菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明解决了游离基因在微生物发酵中不稳定、易丢失、不利于大规模的发酵生产，生产桧烯的原料成本高问题，本发明通过CRISPR‑Cas9系统对酿酒酵母基因组进行编辑，将含有Cas9基因的pML104质粒转入酵母，在酵母中表达Cas9蛋白，同时转入含有同源臂的供体DNA，将桧烯合成酶基因SabS1整合到GAL80位点，同时将GAL80基因敲除，而不引入其它标记基因，利用5‑FOA筛选质粒丢失的转化子酵母菌株，最终获得合成桧烯的基因工程菌；并用该菌株在含有合适碳源、氮源及其他生长因子的条件下，发酵生产桧烯。本发明可用于大规模发酵生产桧烯。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 合成 基因工程 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种合成桧烯的基因工程菌，其特征在于，该基因工程菌的出发菌株为酵母菌，所述酵母菌敲除了GAL80基因，含有经过密码子优化的桧烯合成酶基因SabS1，GenBank登录号为DQ785794.1，其序列如SEQ1所示，所述桧烯合成酶基因SabS1整合在该酵母菌株染色体GAL80位点。
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