[发明专利]一种荧光定量PCR技术防治肺结核的方法在审
| 申请号： | 201711141303.5 | 申请日： | 2017-11-17 |
| 公开（公告）号： | CN109797205A | 公开（公告）日： | 2019-05-24 |
| 发明（设计）人： | 白金桃 | 申请（专利权）人： | 白金桃 |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 741000 甘*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | 一种荧光定量PCR技术防治肺结核的方法，反应体系（40μl）：4.0μl10×buffer，7.0mmol/LMg2+，200μmol/L dNTP，0.2μmol/L上下游引物，0.2μmol/L探针，4μlLDNA模板，2.5U Taq DNA聚合酶。94℃ 3min，94℃ 20s，52℃ 20s，72℃ 20s，40次循环。按照荧光定量PCR分析软件设定基线（baseline）与阈值（threshold），以结核分枝杆菌H37Ra为参考菌株，PCR扩增IS6110基因并克隆到质粒载体。提取纯化重组DNA，10倍系列准确定量稀释102～107Copies/ml的DNA模板，分别取4μl进行荧光定量PCR扩增。呈对数增长，Ct值≤36即可判定为阳性；如扩增曲线不规则或Ct值＞40，报告为阴性。 | ||
| 搜索关键词： | 荧光定量PCR 肺结核 结核分枝杆菌 参考菌株 对数增长 分析软件 扩增曲线 提取纯化 质粒载体 准确定量 重组DNA 不规则 次循环 防治 基线 稀释 阴性 扩增 探针 引物 判定 克隆 | ||
【主权项】：
1. 一种荧光定量PCR技术防治肺结核的方法，反应体系（40μl）：4.0μl10×buffer，7.0mmol/LMg2+，200μmol/L dNTP，0.2μmol/L上下游引物，0.2μmol/L探针，4μlLDNA模板，2.5U Taq DNA聚合酶；94℃ 3min，94℃ 20s，52℃ 20s，72℃ 20s，40次循环；按照荧光定量PCR分析软件设定基线（baseline）与阈值（threshold），以结核分枝杆菌H37Ra为参考菌株，PCR扩增IS6110基因并克隆到质粒载体；提取纯化重组DNA，10倍系列准确定量稀释102～107Copies/ml的DNA模板，取4μl进行荧光定量PCR扩增；呈对数增长，Ct值≤36即可判定为阳性；如扩增曲线不规则或Ct值＞40，报告为阴性。
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