[发明专利]一种产琥珀酸放线杆菌基因敲除方法有效
| 申请号： | 201711156168.1 | 申请日： | 2017-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN107916247B | 公开（公告）日： | 2020-12-08 |
| 发明（设计）人： | 姜岷;朱君如;信丰学;章文明;董维亮;马江锋 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/74;C12N15/65;C12R1/01 |
| 代理公司： | 江苏致邦律师事务所 32230 | 代理人： | 徐蓓;尹妍 |
| 地址： | 211816 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种产琥珀酸放线杆菌基因敲除方法。通过构建目的基因左右同源臂；构建带有抗生素筛选标记及负筛选标记的自杀质粒；将目的基因左右同源臂连接自杀质粒，并转入供体菌感受态细胞中，通过抗性平板涂布筛选正确的阳性单克隆并测序验证；将正确的阳性单克隆转入目的菌株产琥珀酸放线杆菌，在抗性平板中筛选发生单交换的阳性单克隆，将发生正确单交换的阳性单克隆进行负筛选得到缺失目的基因的重组菌株。本发明的方法针对产琥珀酸放线杆菌敲除目的基因，其操作过程简单，转化效率高，适用于多基因敲除，且能够实现目的基因的无痕敲除。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 琥珀酸 放线 杆菌 基因 方法 | ||
【主权项】：
一种产琥珀酸放线杆菌基因敲除方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）构建目的基因左右同源臂，并测序验证；（2）构建带有抗生素筛选标记及负筛选标记的自杀质粒；（3）将目的基因左右同源臂连接自杀质粒，并转入供体菌感受态细胞中，通过抗性平板涂布筛选正确的阳性单克隆并测序验证；（4）将正确的阳性单克隆转入目的菌株产琥珀酸放线杆菌，在抗性平板中筛选发生单交换的阳性单克隆，将发生正确单交换的阳性单克隆进行负筛选得到缺失目的基因的重组菌株。
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