[发明专利]一种近红外光谱测定地龙提取中间体中蚓激酶效价的方法

摘要

本发明公开了一种近红外光谱测定地龙提取中间体中蚓激酶效价的方法。其采用的模型的建立方法为：采集不同地龙提取中间体样品的近红外光谱，采用纤维平板法检测不同地龙提取中间体样品的蚓激酶效价；采用PCA对地龙提取中间体样品的近红外光谱进行分析，剔除异常地龙提取中间体样品，通过KS算法对剔除异常样品的不同地龙提取中间体样品的近红外光谱进行分析并划分校正集和验证集；采用一阶导数SG15点平滑与标准化组合方法进行预处理；利用SPA、UVE、CARS、GA及CC五种非连续变量选择算法的联用对预处理后的光谱进行建模变量选择；利用选择的建模变量建立地龙提取中间体中蚓激酶效价的偏最小二乘定量分析模型。

主权项

1.一种近红外光谱测定地龙提取中间体中蚓激酶效价模型的建立方法，其特征是，(1)采集不同地龙提取中间体样品的近红外光谱，采用纤维平板法检测不同地龙提取中间体样品的蚓激酶效价；(2)采用主成分分析法对地龙提取中间体样品的近红外光谱进行分析，剔除异常地龙提取中间体样品，通过Kennard‑Stone算法对剔除异常点的地龙提取中间体样品划分校正集与验证集，校正集用于模型的建立，验证集用于评价模型的预测能力；(3)采用一阶导数SG15点平滑与标准化组合方法对近红外光谱进行预处理；(4)利用连续投影算法、无效信息变量消除法、竞争性自适应加权算法、遗传算法及相关系数法五种非连续变量选择算法的联用对预处理后的光谱进行建模变量选择；(5)利用步骤(4)选择的建模变量建立地龙提取中间体中蚓激酶效价的偏最小二乘定量分析模型；其中，所述纤维平板法的步骤为：1)纤维平板制备：称取适量琼脂糖，加磷酸盐缓冲液后，加热使溶解，并加入牛纤维蛋白原溶液、牛纤维蛋白溶酶原溶液、牛凝血酶溶液，混匀后迅速倒入水平放置的平皿中，冷却凝固后，置于4℃保存1h，此板即为标准纤维蛋白板；2)对照品溶液的配制：取蚓激酶标准品，制成浓度分别为每毫升中含4000、5000、8000、10000蚓激酶单位的溶液；3)点样培养：精密量取蚓激酶标准品溶液和供试品溶液10μL，在提前打好孔的纤维平板上点样，将纤维平板在37℃条件下恒温培养18h；4)效价的确定：培养结束后，取出纤维平板，用游标卡尺测量溶圈互相垂直的两个直径，以蚓激酶标准品单位数的对数为横坐标，垂直两直径乘积的对数为纵坐标，计算准曲线回归方程，将供试品垂直两径乘积的对数带入标准曲线回归方程，计算供试品效价单位数。