[发明专利]一种iTRAQ标记在骨关节炎模型中的应用

摘要

本发明公开了一种iTRAQ标记在骨关节炎模型中的应用，①样品准备②提取STR/ort模型组和对照组血清，将两组分别等体积混合，采用丙酮沉淀法将蛋白质沉淀后定量③STR/ort模型组和对照组血清差异蛋白按差异比例>1.2或<0.8，鉴定到的肽段数至少>2入选，测它们在OA的系统网络中发挥的功能及可能的相互作用，筛选候选OA标志物。本发明通过人群样本进行标志物的确认，评估这些OA候选标志物诊断OA的价值并分析其与临床的相关性，提出它们在OA的预防、早期诊断等临床应用方面的可行性，及其在人群骨关节健康预警中的意义。

主权项

一种iTRAQ标记在骨关节炎模型中的应用，其特征在于：由以下步骤组成：①样品准备：STR/ort模型小鼠和对照小鼠各10只，按清洁级动物的饲养要求饲养在半屏障系统中；养至20周龄（成年），每只鼠经眼球取血0.9‑1.5 mL； 血样4℃静置1 h 后，5000 r/min离心5 min，取上清液,按50 μL/管装入0.2 mL EP管，做好标注，‑80℃保存备用；②提取STR/ort模型组和对照组血清，将两组分别等体积混合，采用丙酮沉淀法将蛋白质沉淀后定量，使每组约含100ug总蛋白，依次进行进行胰酶酶解、还原烷基化、iTRAQ 标记等，过程严格遵照iTRAQ试剂盒说明书进行；将iTRAQ标记后的STR/ort模型组和对照组血清酶解产物等量混合，进行一维SCX和二维nano‑LC色谱分离后，进入质谱仪分析；③STR/ort模型组和对照组血清差异蛋白按差异比例>1.2或<0.8，鉴定到的肽段数至少 >2入选，利用Gene Ontology Consortium、Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes、protein‑protein interaction prediction database等数据库对入选蛋白进行分析，预测它们在OA的系统网络中发挥的功能及可能的相互作用，筛选候选OA标志物。