[发明专利]一种基于NMR代谢组学技术解析怀山药营养成分分布的方法

摘要

本发明提出了一种基于NMR代谢组学技术解析怀山药营养成分分布的方法，建立了铁棍山药样本的制备，营养成分的提取、测定、识别，营养成分的分布解析。本发明样品预处理仅为500‑700 mg山药冻干粉，就可以获得提取物的结构信息，具有较好的重现性，建立了

主权项

1.一种基于NMR代谢组学技术解析怀山药营养成分分布的方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1怀山药样本的制备：将怀山药样品清洗干净、晾干，同一根怀山药纵向分为两部分，怀山药带皮组和怀山药去皮组，将两组分别切成薄片，薄片经冷冻干燥后，粉碎得怀山药带皮组冻干粉和怀山药去皮组冻干粉，以待后续分析；/nS2怀山药营养成分的提取：分别称取怀山药带皮组冻干粉和怀山药去皮组冻干粉，置于不同的离心管中，加入甲醇溶液后，经震荡、提取、离心后，取上清Ⅰ经真空浓缩蒸干得到残渣，然后向残渣中加入氘代甲醇和0.2M的磷酸缓冲溶，混匀后置于离心管中使残渣充分溶解，离心后取上清Ⅱ待测定；/nS3怀山药营养成分的测定：分别称取两组的上清Ⅱ置于测定仪器中，测定仪器采用布鲁克AV-600 MHz核磁共振光谱仪，5 mm多核宽带观测探头，观测频率为600.13 MHz，脉冲序列采用NOESYPR1D实现残余水峰的压制，观测频率为600.13 MHz；/nS4怀山药营养成分的分析：利用偏最小二乘法判别分析OPLS-DA对怀山药带皮组和去皮组进行分析；/n所述步骤S1中薄片的厚度为2-3mm，冷冻干燥处理为先将薄片置于-80℃环境中过夜冷冻，取出后迅速于冷冻干燥机内-90℃真空低温冷冻干燥72小时；/n所述步骤S2的具体操作为分别称取500-700 mg怀山药带皮冻干粉和怀山药去皮冻干粉，置于不同的50 mL离心管中，加入8-15 mL 70 %的甲醇溶液，涡旋振荡器上震荡10-15min，超声提取30-45 min，4500 rp/m离心8-10分钟，将两组的上清Ⅰ移至25 mL的圆底玻璃烧瓶中，真空浓缩蒸干得到两组残渣，分别向两组蒸干后的残渣中加入 560-700 μL氘代甲醇和240-300 μL 0.2M的磷酸缓冲溶液，混匀后吸出并置于5 mL 离心管中，涡旋2-5 min，超声2-5 min，使提取残渣充分溶解，以12000 rp/m离心10-15 m in，分别移取500-700 μL两组的上清Ⅱ至5 mm的核磁管中以待测定。/n