[发明专利]一种发现的蛋白标志物对肝癌的影响分析方法

摘要

本发明公开了一种发现的蛋白标志物对肝癌的影响分析方法，采用实时荧光定量RT‑PCR和免疫印迹Western blot技术分别检测肝癌及肝良性肿瘤患者、正常人肝组织中的肝癌新标志物，明确其在基因及蛋白水平的表达量及其定位，分析其与肝癌患者临床病理的关系；构建带有荧光标签的肝癌新蛋白标志物编码基因的真核细胞表达载体，并转染肝癌细胞株表达；采用激光共聚焦等测定转染前后的细胞特征；本发明寻找有效的肿瘤标志物用于癌变机理研究、疾病的早期诊断及预后判断具有重要意义。

主权项

一种发现的蛋白标志物对肝癌的影响分析方法，其特征在于：由以下步骤组成：①采用实时荧光定量RT‑PCR和免疫印迹Western blot技术分别检测肝癌及肝良性肿瘤患者、正常人肝组织中的肝癌新标志物，明确其在基因及蛋白水平的表达量及其定位，分析其与肝癌患者临床病理的关系；②构建带有荧光标签的肝癌新蛋白标志物编码基因的真核细胞表达载体，并转染肝癌细胞株表达；采用激光共聚焦等测定转染前后的细胞特征；③采用SiRNA干扰技术抑制肝癌细胞株中肝癌新蛋白标志物的基因表达，采用流式细胞仪、透射电镜等观察沉默前后肝癌细胞系的标志物表达、细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡变化等情况；④分别将标志物基因转染前后的肝癌细胞株行动物致瘤实验，采用活体小动物成像等技术研究肝癌新蛋白标志物对肿瘤生长、浸润、转移的影响；⑤通过生物信息学分析构建肝癌血清关键蛋白多肽调控网络，解析最终所筛选出的肝癌关键蛋白多肽的功能；⑥通过大样本MRM绝对定量验证，计算肝癌关键蛋白多肽诊断肝癌的灵敏度、特异度、 阳性预测值和阴性预测值，以及与肝癌临床不同病理类型、不同病程、原发与转移、疗效等相关分析，提出它们在肝癌的预防、早期诊断、病程预测和预后判断等临床应用方面的可行性。