[发明专利]一种基于双酶信号级联放大的微小RNA-21超灵敏检测方法

摘要

本发明一种基于双酶信号级联放大的微小RNA‑21超灵敏检测方法；包括辣根过氧化物酶标探针的制备：采用EDC偶联羧基氨基的方法，通过DNA单链将羧基化聚苯乙烯微球与辣根过氧化物酶进行偶联；双链特异性核酸酶辅助靶标回收：双链特异性核酸酶特异性切割探针中与待检RNA互补配对的DNA单链，引发靶标循环反应，导致切割释放更多的辣根过氧化物酶，实现信号放大；辣根过氧化物酶信号放大：收集上清中切割释放的辣根过氧化物酶，加入TMB显色底物，通过颜色变化实现裸眼定性，通过吸光度值的变化实现酶标定量。该方案很好地区分微小RNA家族成员的差异，适合高危人群的社区肿瘤筛选，在生物医学研究和临床诊断中具有很大应用价值。

主权项

1.一种基于双酶信号级联放大的微小RNA-21超灵敏检测方法，其特征在于包括如下步骤：1)辣根过氧化物酶标探针的制备：采用EDC偶联羧基氨基的方法，通过DNA单链将羧基化聚苯乙烯微球与辣根过氧化物酶进行偶联；2)双链特异性核酸酶辅助靶标回收：双链特异性核酸酶特异性切割探针中与待检RNA互补配对的DNA单链，但保持待检RNA的完整性，引发靶标循环反应，导致切割释放更多的辣根过氧化物酶，实现信号放大；3)辣根过氧化物酶信号放大：收集上清中切割释放的辣根过氧化物酶，加入TMB显色底物，可通过颜色变化实现裸眼定性，通过吸光度值的变化实现酶标定量。