[发明专利]一种能特异性敲减RBM47基因的慢病毒的构建方法及其应用在审
申请号: | 201711210750.1 | 申请日: | 2017-11-28 |
公开(公告)号: | CN108373999A | 公开(公告)日: | 2018-08-07 |
发明(设计)人: | 宋鑫;李瑞蕾;刘敏;孟旭东 | 申请(专利权)人: | 信雅生物科技(苏州)有限公司 |
主分类号: | C12N7/01 | 分类号: | C12N7/01;C12N15/113;C12N5/10;A61K31/713;A61P35/00 |
代理公司: | 上海宣宜专利代理事务所(普通合伙) 31288 | 代理人: | 刘君 |
地址: | 215123 江苏省苏州市苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明提供了一种人RNA结合蛋白在临床肺癌中表达情况及该基因在肺癌中的作用,涉及分子生物学领域及肿瘤学领域。该种人RNA结合蛋白的国际命名为RBM47,基因ID号为54502,具有RBM47‑a和RBM47‑b的两种类型的亚型。基于该基因序列所研制的siRNA可能对肺癌的靶向治疗具有十分重要的应用价值。利用该慢病毒感染肺癌细胞,可以抑制肺癌细胞的增殖、克隆形成能力及细胞周期进展。本发明公开了能特异性敲减RBM47基因的shRNA序列及慢病毒的制备方法,以及该慢病毒对肺癌细胞的作用。 | ||
搜索关键词: | 肺癌细胞 慢病毒 肺癌 基因 人RNA结合蛋白 分子生物学领域 细胞周期进展 慢病毒感染 肿瘤学领域 靶向治疗 基因序列 构建 亚型 制备 增殖 应用 克隆 | ||
【主权项】:
1.一种特异性敲减人RBM47基因的慢病毒的构建方法,其包括如下步骤:Step1,通过PCR合成能特异性敲减人RBM47基因的shRNA序列;Step2,构建能特异性干扰RBM47基因的重组质粒;Step3,包装能特异性干扰RBM47基因的慢病毒;Step4,筛选验证Step3中的能够特异性干扰RBM47基因的慢病毒;Step5,观察Step3中能够特异性干扰RBM47基因的慢病毒对肺癌细胞生物学功能的影响;其特征在于:在所述的步骤Step1中,针对人RBM47基因的编码区,设计2个能特异性敲减人RBM47基因的靶序列,分别为:RNAi‑1‑F:CcggccGCCCAATAACTCCAGTATACTCGAGTATACTGGAGTTATTGGGCGGTTTTTg;RNAi‑1‑R:aattcaaaaaccGCCCAATAACTCCAGTATACTCGAGTATACTGGAGTTATTGGGCGG;RNAi‑2‑F:CcgggaTGAAGAAGCGCGAGGAAATCTCGAGATTTCCTCGCGCTTCTTCATCTTTTTg;RNAi‑2‑R:aattcaaaaagaTGAAGAAGCGCGAGGAAATCTCGAGATTTCCTCGCGCTTCTTCATC。
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