[发明专利]磁微粒化学发光法测定地高辛含量的试剂盒及其检测方法

摘要

本发明为磁微粒化学发光法测定地高辛含量的试剂盒及其检测方法，提供了一种地高辛抗原衍生物的制备方法，可以实现地高辛抗原与生物素或者酶间接地连接，在试剂盒中构建了生物素化地高辛抗原衍生物+抗体酶标试剂+校准品与酶标地高辛抗原衍生物+生物素化地高辛鼠单抗+校准品两个检测体系，可用于固相偶联，又能用于发光标记的地高辛衍生物，适用于对地高辛抗原进行生物素、酶标甚至蛋白等不同情况的偶联，这样不同企业在测试时可以更灵活的选取，并且只需要通过制备地高辛抗原衍生物这个中间体就能实现。应用该衍生物建立的不同检测体系测值与给值相关性都在0.96以上，两种测定体系相关性为0.9585。整个反应体系反应时间短，避免了放射性污染，延长了试剂效期，灵敏度高，测试结果准确，简化了实验操作流程。

主权项

1.一种磁微粒化学发光法测定人血清中地高辛含量的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括生物素化地高辛抗原衍生物、抗体酶标试剂、酶标地高辛抗原衍生物、生物素化地高辛鼠单抗和校准品；所述试剂盒中主要组分按照如下制备方法制得：一、地高辛抗原衍生物制备过程:1)、将地高辛和琥珀酸酐分别用DMF缓冲液溶解，得到地高辛‑DMF溶液和琥珀酸酐‑DMF溶液；2)、将地高辛‑DMF溶液加入琥珀酸酐‑DMF溶液中，65℃反应4～6h；加入三丁胺和氯甲酸异丁酯，室温反应20～40min，得到地高辛‑琥珀酸酐的DMF溶液；加入赖氨酸溶液，室温反应2～4h；3)、将反应物用水透析过夜，调节pH析出沉淀，将沉淀放置室温0.5～2h，然后在4℃放置2～4h，4℃离心10‑15min，用Na2CO3缓冲液溶解沉淀配置成地高辛抗原衍生物的溶液；二、生物素化地高辛抗原衍生物制备过程:将生物素‑NHS用DMSO进行溶解后，按照地高辛抗原衍生物与生物素‑NHS摩尔比为1:18～22加入步骤一所得的地高辛抗原衍生物，室温反应2h；用透析袋透析反应产物，将透析液稀释至工作液浓度；三、抗体酶标试剂制备过程：将地高辛鼠单抗和碱性磷酸酶分别活化后，将二者混合2‑8℃反应14～20h小时；将反应物用层析柱进行纯化，收集I峰II峰进行混合后用缓冲液将配置成工作液浓度；四、酶标地高辛抗原衍生物制备过程：将地高辛抗原衍生物和碱性磷酸酶分别活化后，将二者混合2‑8℃反应14～20h小时；将反应物用层析柱进行纯化，收集I峰II峰进行混合后用缓冲液将配置成工作液浓度；五、生物素化地高辛鼠单抗制备过程：1)将生物素‑NHS，用DMSO进行溶解得到DMSO溶解的生物素，加入地高辛鼠单抗，充分混匀后室温反应2h；透析后将透析液稀释至工作液浓度。