[发明专利]一种乙酰基四肽-2的制备方法

摘要

本发明公开了一种乙酰基四肽‑2的制备方法，该方法将Fmoc‑L‑m‑Tyr‑OH与叔丁基二甲基氯硅烷、N,N二异丙基乙胺进行反应合成Fmoc‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑OH，然后在Rink‑Amid‑AM Resin上依次连接Fmoc‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑OH、Fmoc‑Val‑OH、Fmoc‑Asp(OtBu)‑OH、Fmoc‑D‑Lys(Boc)‑OH，经脱保护、切割得乙酰基四肽‑2产品。本发明将固相合成与液相合成相结合，先通过液相合成方法合成Fmoc‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑OH，再通过经典固相合成法合成乙酰基四肽‑2，既有降低成本、易于操作的优点，又有经典固相法合成效率高、操作简单的特点，是一种相对理想的乙酰基四肽‑2合成方法。

主权项

一种乙酰基四肽‑2的制备方法，其特征在于该方法由下述步骤组成：(1)合成Fmoc‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑OH①合成Fmoc‑L‑m‑Tyr‑OH以水和乙腈的混合液为溶剂，将L‑m‑Tyr‑OH、芴甲氧羰酰琥珀酰亚胺、三乙胺在室温下进行反应，反应完后用盐酸调节pH<5，浓缩除去乙腈，用硫酸氢钾水溶液和乙酸乙酯萃取，对乙酸乙酯相进行浓缩，浓缩液用石油醚结晶并淋洗过滤，得到Fmoc‑L‑m‑Tyr‑OH；②合成Fmoc‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑OH以乙腈为溶剂，将Fmoc‑L‑m‑Tyr‑OH、叔丁基二甲基氯硅烷、N,N‑二异丙基乙胺在室温下进行反应，反应完成后用硫酸氢钾水溶液调节pH<5，浓缩除去乙腈，用硫酸氢钾水溶液和用乙酸乙酯萃取，对乙酸乙酯相进行浓缩，浓缩物柱层析纯化，得到Fmoc‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑OH；(2)合成Fmoc‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin以N,N‑二甲基甲酰胺为溶剂，将Rink Amid‑AM Resin、Fmoc‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑OH、1‑羟基苯并三唑、N,N‑二异丙基碳二亚胺在室温下进行反应，得到Fmoc‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin；(3)合成Fmoc‑Val‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin将步骤(2)得到的Fmoc‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin用哌啶的N,N‑二甲基甲酰胺溶液脱除Fmoc保护基，得到H2N‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin；以N,N‑二甲基甲酰胺为溶剂，将H2N‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin、Fmoc‑Val‑OH、1‑羟基苯并三唑、N,N‑二异丙基碳二亚胺在室温下进行反应，得到Fmoc‑Val‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin；(4)合成Fmoc‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Val‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin按照步骤(2)的方法在步骤(3)得到的Fmoc‑Val‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin上连接Fmoc‑Asp(OtBu)‑OH，得到Fmoc‑Asp(OtBu)‑Val‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin；然后按照步骤(3)的方法在得到的Fmoc‑Asp(OtBu)‑Val‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin上连接Fmoc‑D‑Lys(Boc)‑OH，得到Fmoc‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Val‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin；(5)合成Ac‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Val‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin将步骤(4)得到的Fmoc‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Val‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin用哌啶的N,N‑二甲基甲酰胺溶液脱除Fmoc保护基，得到H2N‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Val‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin；然后将H2N‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Val‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin中加入二氯甲烷与乙酸酐、N,N‑二异丙基乙胺的混合液，在室温下进行反应，得到Ac‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Val‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin；(6)制备乙酰基四肽‑2将Ac‑D‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Val‑L‑m‑Tyr(TBDMS)‑Rink Amide‑AM Resin用四丁基氟化胺的N,N‑二甲基甲酰胺溶液脱除TBDMS保护基，然后用切割液脱除Boc和OtBu保护基，过滤，将滤液加入冷的甲基叔丁基醚中析出乙酰基四肽‑2粗品，粗品经高效液相色谱纯化、减压浓缩、冷冻干燥，得到纯度大于95％的乙酰基四肽‑2产品。