[发明专利]基于Cpf1的植物基因组定点编辑方法有效
| 申请号： | 201711249583.1 | 申请日： | 2017-12-01 |
| 公开（公告）号： | CN108130342B | 公开（公告）日： | 2022-01-11 |
| 发明（设计）人： | 朱健康;王木桂;毛妍斐;陆钰明 | 申请（专利权）人： | 中国科学院分子植物科学卓越创新中心 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N9/22;A01H5/00;A01H6/46;A01H6/20;A01H6/54;A01H6/82 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 崔佳佳;马莉华 |
| 地址： | 200031 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明提供了基于Cpf1的植物基因组定点编辑方法。具体地，本发明提供了基于Cpf1(AsCpf1、FnCpf1、LbCpf1)的植物基因组定点编辑的核酸构建物，载体或载体组合，以及植物基因组定点编辑方法。具体地，所述的核酸构建物包括第一表达盒和任选的第二表达盒，所述的第一表达盒为Cpf1‑NLS融合蛋白表达盒，所述的第二表达盒为crRNA表达盒。利用本发明的方法,可以在预定的植物基因组位点，简便而高效地进行单基因敲除、多基因敲除或者同源重组和外源片段的定向插入。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 cpf1 植物 基因组 定点 编辑 方法 | ||
【主权项】：
一种用于植物基因组定点编辑的核酸构建物，其特征在于，所述的核酸构建物包括第一表达盒和任选的第二表达盒；其中，所述的第一表达盒为Cpf1‑NLS融合蛋白表达盒，其中所述的Cpf1‑NLS融合蛋白具有式I结构：P1‑A‑B1‑C‑B2‑D‑B3‑E1 (I)式中，P1为第一启动子；A为无、信号肽、和/或蛋白标签序列；B1为无或核定位信号序列NLS；B2为无或核定位信号序列NLS；B3为无或核定位信号序列NLS；附加条件是，B1、B2和B3中至多一个为无；或者B1和B3为无，而B2为核定位信号序列NLS；C为Cpf1的N端片段元件；D为Cpf1的C端片段元件；E1为第一终止子；其中，所述的N端片段元件和C端片段元件共同构成一个完整的Cpf1蛋白；以及，所述的第二表达盒为crRNA表达盒，在所述的crRNA表达盒含有对应于成熟型crRNA或非成熟型pre‑crRNA的编码序列。
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