[发明专利]一种基于树枝状高分子双重放大标记小分子竞争探针的制备及应用

摘要

本发明涉及一种基于树枝状高分子双重放大标记小分子竞争探针的制备及应用，属于化学发光体外诊断中的化学发光标记领域。该双增强放大小分子标记方法包括如下步骤：步骤一：树枝状高分子‑链霉亲和素‑化学发光信号物质复合体的制备；步骤二：竞争小分子的生物素化标记；步骤三：双重放大化学发光免疫标记检测探针复合体的制备。本发明中双重放大化学发光免疫检测探针，将增强发光强度和增加磁性微球的探测分子结合量两种方式有效结合，利用生物素亲合素间结合作用实现一次放大，同时利用标记了信号物质的树枝状高分子实现另一次放大，双重放大模式极大的提升了化学发光免疫分析信号强度。

主权项

1.一种基于树枝状高分子双重放大标记小分子竞争探针的制备及应用，其特征在于，包括如下步骤：步骤一：取一定摩尔数的树枝状高分子，加入EDC进行活化，在碳酸盐缓冲液(pH 9.5)中，加入竞争小分子37℃搅拌反应1h，反应结束后按照摩尔比1∶10的比例加入购置的活化信号物质37℃搅拌反应1h，最后加入0.05mol/L Tris‑HCl进行封闭反应30min，整个反应结束后，在PBS中透析去除未反应的小分子化学发光信号物质，收集透析后溶液，获得修饰化学发光信号物质‑链霉亲和素‑树枝状大分子复合物；步骤二：取购置的活化生物素，按照摩尔比例1∶3的比例同竞争小分子进行混合反应，37℃反应1h，得生物素化待测物质探测分子备用；步骤三：将步骤一制得的修饰信号物质‑链霉亲和素‑树枝状大分子符合物按照一定摩尔比加入到步骤二制得的生物素化竞争小分子中，继续反应37℃反应30min，转入偷袭袋中透析去除未反应的小分子及信号物质，即得所述双重放大竞争探针。