[发明专利]一种基于CRISPR/Cas9技术介导绒山羊VEGF基因定点敲入的方法有效
| 申请号： | 201711272376.8 | 申请日： | 2017-12-06 |
| 公开（公告）号： | CN108570479B | 公开（公告）日： | 2020-04-03 |
| 发明（设计）人： | 梁红宇;刘东军;梁浩;呼啸;王辉;王志刚 | 申请（专利权）人： | 内蒙古大学 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N15/85;C12N15/877;A01K67/027 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 010021 内蒙古自*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | 本发明利用CRISPR/Cas9系统介导完成绒山羊VEGF基因定点敲入，其是依据绒山羊的CCR5基因序列，构建基于CRISPR‑Cas9系统的gRNA表达载体及VEGF同源重组载体。然后将优化后的三种载体共同转入绒山羊胎儿成纤维细胞中，获得VEGF基因定点敲入的阳性细胞。利用体细胞核移植技术制备VEGF基因定点整合绒山羊。本发明所构建的基于CRISPR/Cas9系统的打靶载体为山羊VEGF基因的定点敲入提供了一种简单快捷安全的途径。该方法在细胞系筛选过程中没有涉及任何筛选标记基因，从而大大提高了转基因动物的安全性，对绒山羊的遗传育种以及基因功能的研究具有重要价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 crispr cas9 技术 绒山羊 vegf 基因 定点 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于CRISPR‑Cas9系统介导绒山羊VEGF基因定点敲入的方法，其特征在于，其是根据绒山羊的CCR5基因序列， 构建基于CRISPR‑Cas9系统的gRNA表达载体和VEGF同源重组载体 ， 然后将优化后的CRISPR‑Cas9载体和上述构建的gRNA表达载体及VEGF同源重组载体共同转入绒山羊胎儿成纤维细胞中，获得VEGF基因定点敲入的细胞。
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