[发明专利]一种去B链30位氨基酸残基的胰岛素前体沉淀的回收方法

摘要

本发明提供了一种去B链30位氨基酸残基的胰岛素前体沉淀的回收方法，包括：对胰岛素前体使用胰蛋白酶进行酶切；将二价金属离子加入到酶切后的反应体系中；调节反应体系的pH值至反应产物的等电点附近；收集获得的沉淀，酶切条件为30℃，1～2h，二价金属离子为具有水溶性的二价金属离子，包括Ni2+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Fe2+和Mn2+，二价金属离子与胰岛素前体的摩尔比为0.5:1～4:1，pH为4.0～6.0，沉淀温度为0～30℃，沉淀时间为0～12h。使用本发明所提供的方法，不需要对酶切的反应体系进行处理，直接进行等电点沉淀，简化了生产工艺。相比目前已有的报道，上清液中产物残留率可以降低10倍以上，优势明显。

主权项

1.一种去B链30位氨基酸残基的胰岛素前体沉淀的回收方法，包括：

(1)对胰岛素前体使用胰蛋白酶或赖氨酰内切酶进行酶切；

(2)将二价金属离子加入到步骤(1)酶切后的反应体系中；

(3)调节反应体系的pH值至反应产物的等电点附近；

(4)收集步骤(3)获得的沉淀。

2.根据权利要求1所述的去B链30位氨基酸残基的胰岛素前体沉淀的回收方法，其特征在于，步骤(1)所述的酶切条件为30℃，1～30h。

3.根据权利要求1所述的去B链30位氨基酸残基的胰岛素前体沉淀的回收方法，其特征在于，步骤(2)所述的二价金属离子为具有水溶性的二价金属离子，包括Ni²⁺、Ca²⁺、Mg²⁺、,Zn²⁺、Cu²⁺、Fe²⁺和Mn²⁺。

4.根据权利要求3所述的去B链30位氨基酸残基的胰岛素前体沉淀的回收方法，其特征在于，所述的二价金属离子为Cu²⁺和Fe²⁺中的一种或两种。

5.根据权利要求1所述的去B链30位氨基酸残基的胰岛素前体沉淀的回收方法，其特征在于，所述的二价金属离子与胰岛素前体的摩尔比为(0.5～4):1。

6.根据权利要求5所述的去B链30位氨基酸残基的胰岛素前体沉淀的回收方法，其特征在于，所述的二价金属离子与胰岛素前体的摩尔比优选为4:1、3:1和2:1中的一种。

7.根据权利要求1所述的去B链30位氨基酸残基的胰岛素前体沉淀的回收方法，其特征在于，步骤(3)所述的pH为4.0～6.0。

8.根据权利要求1所述的去B链30位氨基酸残基的胰岛素前体沉淀的回收方法，其特征在于，步骤(3)所述的pH为4.4～4.8。

9.根据权利要求1所述的去B链30位氨基酸残基的胰岛素前体沉淀的回收方法，其特征在于，步骤(4)所述的沉淀温度为0～30℃。

10.根据权利要求1所述的去B链30位氨基酸残基的胰岛素前体沉淀的回收方法，其特征在于，步骤(4)所述的沉淀时间为0～12h。