[发明专利]一种莫勒菌的原生质体制备方法有效
| 申请号： | 201711312365.8 | 申请日： | 2017-12-12 |
| 公开（公告）号： | CN107904178B | 公开（公告）日： | 2021-06-01 |
| 发明（设计）人： | 邱君志;睢珺文;薛青霖;牛亚静;杨芳;谢勇啸;陈宇熹;魏秀艳;涂新亚;姚灵丹 | 申请（专利权）人： | 福建农林大学 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;C12R1/645 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350002 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： |
一种莫勒菌的原生质体的制备方法,接PDA菌体培养基上健壮菌丝体于PDB液体培养基中，在150rpm，28℃摇床培养36‑54h,再将菌丝用四层无菌纱布过滤后，用无菌的研钵对菌丝进行研磨。将研磨好的菌丝放入PDB培养基中于100rpm，28℃摇床培养16h。再用四层无菌纱布过滤出菌丝，再用无菌药匙将菌丝转入无菌的三角瓶中，并用10mL 0‑0.08%β‑巯基乙醇预处理菌丝体30分钟,采用20‑26.6mg真菌溶壁酶（酶液pH5.6‑6.2），在24‑30℃酶解2.4‑3.3h,用0.4‑0.7mol/L某溶液做渗透压稳定剂时,原生质体数量达到2.2‑3.2×10 |
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| 搜索关键词： | 一种 莫勒菌 原生 质体 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种莫勒菌的原生质体制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）接PDA菌体培养基上健壮莫勒菌菌丝体于PDB液体培养基中，在150rpm，28℃摇床培养36‑54h，再将菌丝用四层无菌纱布过滤后，用无菌的研钵对菌丝进行研磨，将研磨好的菌丝放入PDB培养基中于100rpm，28℃摇床培养16h；（2）再用四层无菌纱布过滤出菌丝，再用无菌药匙将菌丝转入无菌的三角瓶中，并用10mL 0‑0.08%β‑巯基乙醇处理菌丝体30分钟， 用pH5.6‑6.2的磷酸盐缓冲液配制0.4‑1.0mol/L的NaCl、KCl、甘露醇或葡萄糖溶液，并用此溶液配制20‑26.6mg/mL真菌溶壁酶，在24‑30℃酶解2.4‑3.3h，用0.4‑0.7mol/LNaCl、KCl、甘露醇或葡萄糖溶液做渗透压稳定剂，原生质体数量达到2.2‑3.2×107个/mL，再生率达15%‑45%。
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