[发明专利]一种环孢菌素H的分离纯化方法

摘要

一种环孢菌素H的分离纯化方法，其中层析柱采用了苯基氨基甲酸酯化β‑环糊精硅胶作为层析柱的填料，进行环孢菌素H的分离纯化，可将原料中的环孢菌素A和环孢菌素H进行有效分离。同时分离纯化过程中，可使用单一极性溶剂，可对溶剂进行回收利用，节约生产成本。洗脱过程中，含有环孢菌素H的交叉部分还可以回收重新纯化，避免造成浪费。同时，该技术方案适用于各种含环孢菌素H的原料,适用性强，可大量制备，可为医药工业提供大量高纯度的环孢菌素H原材料。

主权项

一种环孢菌素H的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：待分离液的制备：将环孢菌素H含量10％以上的环孢菌素H粗品溶解于极性溶剂，过滤后得到含环孢菌素H的溶液，按溶液体积比15‑25％加入水进行搅拌稀释，制成待分离液；上样：将待分离液上样层析柱，形成含有环孢菌素H的层析柱；所述层析柱的制备包括：将苯基氨基甲酸酯化β‑环糊精硅胶用甲醇浸泡后装柱，再用体积百分比浓度35‑40％的极性溶剂平衡层析柱；洗脱：用洗脱液对层析柱进行梯度洗脱，所述洗脱液中含有质量百分比为0.1％的甲酸或乙酸，所述洗脱液中极性溶剂的体积百分比浓度由35‑40％逐步提高至45‑50％，洗脱流速为每小时3‑5个柱体积，用HPLC进行跟踪监测，收集环孢菌素H含量95％以上的洗脱液；浓缩结晶：将洗脱步骤中收集的环孢菌素H含量95％以上的洗脱液进行浓缩，浓缩后产物用乙酸乙酯进行萃取，并取上相萃取液减压浓缩后得到稠状浓缩物，稠状浓缩物加入丙酮溶解过滤后，再依次加入甲基叔丁基醚和去离子水，最后逐步加入正己烷至溶液中出现白色不溶物后，降温至4℃，析出白色固体；干燥：过滤浓缩结晶步骤中析出的白色固体，将白色固体在40‑60℃下进行干燥，得到环孢菌素H成品。