[发明专利]一种来源于人嗅黏膜间充质干细胞外泌体的制备方法及外泌体的应用

摘要

本发明提供了一种来源于人嗅黏膜间充质干细胞外泌体的制备方法，属于干细胞技术领域，当P4和/或P5代嗅黏膜间充质干细胞的融合率为85～90％时，将培养物进行第一离心分离，将得到的第一上清液进行第二离心分离，将得到的第二上清液进行第三离心分离，将得到的第三上清液过滤，将得到的滤液与聚乙二醇溶液混合，静置孵育8～10h后进行第四离心分离，将得到的第四沉淀经生理盐水洗涤，第五离心分离后，得到的沉淀物为外泌体。采用本发明的方法，不会损伤外泌体的囊泡，保证外泌体获取的量，而且得到的外泌体能够促进人脑微血管上皮细胞的增殖和提高细胞的迁移率。

主权项

1.一种来源于人嗅黏膜间充质干细胞外泌体的制备方法，包括以下步骤：1)当P4和/或P5代嗅黏膜间充质干细胞的融合率为85～90％时，得到细胞培养物；2)将所述步骤1)得到的细胞培养物进行第一离心分离，得到第一上清液和第一沉淀，所述第一离心分离的速度为200～400rpm；3)将所述步骤2)得到的第一上清液进行第二离心分离，得到第二上清液和第二沉淀，所述第二离心分离的速度为2,000～3,000rpm；4)将所述步骤3)得到的第二上清液进行第三离心分离，得到第三上清液和第三沉淀，所述第三离心分离的重力加速度为9,000～11,000g；5)将所述步骤4)得到的第三上清液过滤除去大囊泡，得到滤液；6)将所述步骤5)得到的滤液与聚乙二醇溶液混合，静置孵育8～10h后进行第四离心分离，得到第四上清液和第四沉淀，所述第四离心分离的重力加速度为90,000～110,000g；所述聚乙二醇的数均分子量为5000～7000；7)将所述步骤6)得到的第四沉淀依次经生理盐水洗涤、第五离心分离，得到的沉淀物为外泌体；所述第五离心分离的重力加速度为90,000～110,000g。