[发明专利]一种东海乌参糖蛋白的提取方法

摘要

本发明公开了一种东海乌参糖蛋白的提取方法，通过将干东海乌参进行前处理、脱脂、粗提以及提纯等步骤，从东海乌参中成功提取到了东海乌参糖蛋白。本发明中使用的是木瓜蛋白酶对东海乌参中的糖蛋白进行提取，通过将东海乌参中的普通蛋白质分解使得糖蛋白成分能够释放到水溶液中，该方法的反应条件非常温和，无需剧烈的反应，能够使得东海乌参糖蛋白能够不被破坏，从而保障了最终得到的东海乌参糖蛋白的质量。同时，酶解法具有非常高的效率，能够使得蛋白质快速分解，因此提升了最终东海乌参糖蛋白的提取效率与产率。

主权项

1.一种东海乌参糖蛋白的提取方法，其特征是，所述的提取方法包括以下步骤：（a）前处理：取干东海乌参，使用冷水浸泡12小时，然后除去东海乌参的内脏及身体表面的淤泥，置于阴凉干燥处阴干，然后置于烘箱中烘干，将烘干后的干东海乌参置于万能粉碎机之中进行粉碎，过80目筛，得到东海乌参干粉；（b）脱脂：取步骤（a）中得到的海乌参干粉，然后将其置于索氏提取器中，使用有机溶剂对其对其进行脱脂，脱脂时间为5‑10小时，脱脂结束后蒸干有机溶剂得到脱脂东海乌参干粉；（c）粗提：取步骤（b）中得到的海乌参干粉5份，然后加入120‑160份PBS缓冲溶液以及0.05‑0.55份木瓜蛋白酶，搅拌均匀后水浴反应18‑24小时，反应结束后将水浴温度升温至100℃，保持5‑10分钟，然后取出静置降至室温，置于离心机中离心分离，收集离心后所得的上清液，得到东海乌参糖蛋白粗提液；（d）精提：取步骤（c）中得到的东海乌参多糖粗提液，向其中加入95%的酒精溶液，静置然后离心分离，取离心所得的沉淀，并将其溶于蒸馏水中，配制成饱和溶液，然后再加入95%的酒精溶液沉淀提纯，反复2‑3次后得到东海乌参糖蛋白精提液；（e）脱色：去步骤（d）中得到的东海乌参糖蛋白精提液100份，向其中加入活性炭5份，超声辅助脱色1小时，过滤取滤液，得到无色东海乌参糖蛋白精提液；（f）分离纯化：取步骤（e）中得到的无色东海乌参糖蛋白精提液通一级滤膜，收集一级截留液；用纯净水稀释一级截留液后再通过二级滤膜，收集二级通过液和二级截留液；用纯净水稀释二级通过液后再通过三级滤膜，收集三级截留液；将二级截留液和三级截留液合并得到东海乌参糖蛋白纯化液，然后减压浓缩至原体积的十分之一，然后离心喷雾干燥，得到东海乌参糖蛋白粉末。