[发明专利]一种多物质组合的烟草外植体防褐化方法

摘要

本发明涉及一种多物质组合的烟草外植体防褐化方法，包括如下步骤步骤（1），种子的消毒；步骤（2），种子培养；步骤（3），烟草外植体培养；步骤（4），防褐化培养。本发明添加D‑异抗坏血酸钠、柠檬酸和氯化钙在培养基中，D‑异抗坏血酸钠具有防褐化的作用，且成本较低，柠檬酸对于PPO的辅基铜离子有螯合作用，从而能有效抑制PPO的活性，来改善褐化现象。而氯化钙在一定浓度时能有效抑制酶活性的作用。同时添加这三种成分对缓解外植体褐化的现象，无需辅助其他防褐化手段。

主权项

一种多物质组合的烟草外植体防褐化方法，其特征在于：包括如下步骤：步骤（1），种子的消毒；步骤（2），种子培养：将步骤（1）得到的种子接种到MS培养基中培养，种子发芽长成幼苗；种子的培养条件为：在培养温度为25±1℃，光照强度30‑50μmol/(m2·s)，光照时间为16h/d的条件下培养60d；步骤（3），烟草外植体培养：将步骤（2）中得到的幼苗，利用打孔器进行打孔得到烟草叶盘，将叶盘置于MS分化培养基中培养，培养条件为：28℃光照培养16h/d，光照强度30‑50μmol/(m2·s)，25℃黑暗培养8h/d，培养5d，得到外植体；所述叶盘MS分化培养基为MS基本培养基中添加0.5mg/L的萘乙酸NAA、2mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、30g/L蔗糖，4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.7；步骤（4），防褐化培养：将步骤（3）中得到的外植体置于MS防褐化培养基中，在28℃光照培养16h/d，光照强度30‑50μmol/(m2·s)，25℃黑暗培养8h/d的条件下培养40d，MS防褐化培养基为MS基本培养基中添加5‑12.5g/L氯化钙，2.5‑7.5g/L D‑异抗坏血酸钠，1‑4g/L柠檬酸、30g/L蔗糖和4g/L的琼脂，培养基的pH值为5‑6。