[发明专利]一种用维生素C、L-半胱氨酸和亚硫酸氢钠防止烟草外植体褐化的方法在审
申请号: | 201711331461.7 | 申请日: | 2017-12-13 |
公开(公告)号: | CN108112475A | 公开(公告)日: | 2018-06-05 |
发明(设计)人: | 邓乐乐;曾婉俐;许力;蒋佳芮;张建铎;向海英;宋春满;张涛;苏杨;李雪梅;陈章玉 | 申请(专利权)人: | 云南中烟工业有限责任公司 |
主分类号: | A01H4/00 | 分类号: | A01H4/00;A01C1/08;A01C1/00 |
代理公司: | 昆明正原专利商标代理有限公司 53100 | 代理人: | 金耀生 |
地址: | 650231 *** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | 本发明是一种用维生素C、L‑半胱氨酸和亚硫酸氢钠防烟草外植体褐化的方法,包括如下步骤:植物种子的消毒、植物种子培养、烟草外植体诱导培养、外植体增殖培养后进行外植体愈伤组织防褐化培养,所述的防褐化培养基为:MS基本培养基中加入防褐添加剂20‑100mg/L维生素C,50‑300mg/L L‑半胱氨酸,50‑100mg/L亚硫酸氢钠,30g/L蔗糖,4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.7。褐化培养处理后,可以有效缓解褐化现象,改善外植体整体的分化状态。添加维生素C、L‑半胱氨酸和亚硫酸氢钠在培养基中,具有使用方便、成本低、效果好等优点。 | ||
搜索关键词: | 亚硫酸氢钠 维生素C 烟草外植体 半胱氨酸 培养基 外植体 褐化 植物种子 防褐化 分化状态 褐化现象 有效缓解 诱导培养 愈伤组织 增殖培养 蔗糖 琼脂 添加剂 消毒 | ||
【主权项】:
一种用维生素C、L‑半胱氨酸和亚硫酸氢钠防烟草外植体褐化的方法,其特征在于:包括如下步骤:步骤1:植物种子的消毒;步骤2:植物种子培养:将步骤(1)得到的消毒后的种子接种到MS培养基中,在培养温度为25±1℃,光照强度30‑50μmol/(m2·s),光照时间为16h/d的条件下培养60d,种子发芽长成有幼苗,所述MS培养基为MS基本培养基+30g/L蔗糖+4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.7 ;步骤(3),烟草外植体诱导培养:将步骤(2)中得到的幼苗置于MS诱导培养基中,控制白天温度为28℃,夜间温度为25℃,光照强度为30‑50μmol/(m2·s),光照时间为16小时/天,培养时间为18天,诱导得到烟草外植体愈伤组织,诱导率为46.2‑95.8%,所述MS诱导培养基为:MS基本培养基+1‑2mg/L6‑苄基腺嘌呤6‑BA+0.2‑0.5mg/L噻重氮苯基脲TDZ+0.1‑1.0mg/L萘乙酸NAA+0.1‑1.0mg/L2,4‑二氯苯氧乙酸2,4‑D+30g/L蔗糖+4.5g/L琼脂,培养基的pH值为5.7;步骤(4),烟草外植体增殖培养:将步骤(3)中得到的烟草外植体愈伤组织置于MS增殖培养基中,控制白天温度为28℃,夜间温度为25℃,光照强度为30‑50μmol/(m2·s),光照时间为16小时/天,培养时间为7天,烟草外植体愈伤组织逐渐分化增殖,增殖率为49.7‑64.3%;所述的MS增殖培养基为:MS基本培养基中加入0.1‑1.0mg/L的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.5‑2.0mg/L萘乙酸NAA、0.1‑0.5mg/L激动素KT、30g/L蔗糖、4.5 g/L琼脂,培养基的pH值为5.7;步骤(5),烟草外植体防褐化培养:将步骤(4)中得到的烟草外植体愈伤组织置于MS防褐化培养基中,控制白天温度为28℃,夜间温度为25℃,光照强度为30‑50μmol/(m2·s),光照时间为16小时/天,培养时间为40天,烟草外植体愈伤组织褐化率为8.2‑31.7%;MS防褐化培养基为:MS基本培养基中加入防褐添加剂20‑100mg/L维生素C,50‑300mg/L L‑半胱氨酸、50‑100mg/L亚硫酸氢钠、30g/L蔗糖、4g/L琼脂,培养基的pH值为5.7,防褐添加剂维生素C与L‑半胱氨酸的加入是在培养基冷却至50℃左右加入。
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