[发明专利]一种检测细胞分裂素6-BA的化学发光免疫传感器的制备方法及其分析方法

摘要

本发明公开了一种检测细胞分裂素6‑BA的化学发光免疫传感器的制备方法及其分析方法，包括以下步骤：以金纳米粒子为固定载体，以共价结合的方式，将细胞分裂素6‑BA相应的包被抗原固定于相应结合位点，从而制得该免疫传感器；在此基础上，采用竞争免疫分析法，联合流动注射，应用于化学发光分析，构建了一个高灵敏的自动化化学发光免疫分析细胞分裂素6‑BA的方法。本发明具有快速，准确，样品用量少，稳定性好，特异性高，灵敏度高等特点，可适用于植物组织内源6‑苄基腺嘌呤(6‑BA)，玉米素，二氢玉米素，激动素等细胞分裂素的测定。

主权项

1.一种检测细胞分裂素6-BA的化学发光免疫传感器的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)金纳米粒子的制备将100mL浓度为0.01％的HAuCl4溶液煮沸，然后在搅拌的过程中，向其中加入2.5mL浓度为1％的柠檬酸三钠，继续加热10min后停止加热，待其冷却到室温后将制得的金纳米粒子分散于浓度为1％的壳聚糖醋酸缓冲液中，置于4℃下保存待用；(2)完全抗原制备取2ml纯甲醇，依次向该甲醇内加入以下试剂：2mg细胞分裂素6-BA核苷；滴加1mL 0.01mol/L NaIO4，室温搅拌20min；180μL 0.1mol/L乙二醇，室温搅拌10min；滴加2mL蛋白溶液，所述蛋白溶液中含有10mg牛血清蛋白或10mg卵清蛋白；滴加浓度为5％的K2CO3调反应液pH至9.3，室温搅拌反应液1h；2mg NaBH4，每30min加1mg，于4℃下搅拌；滴加浓度为0.1mol/L HCl调反应液pH至6.5，搅拌反应液1h；将上述最终得到的反应液于4℃下用2.5L PBS透析，每5h更换透析液一次，透析3天后，将透析所得共轭物质存于0.01mmol/L PBS(pH 7.4)中，于-20℃下保存，所述共轭物质即为包被抗原；(3)化学发光免疫传感器的组装用环氧硅烷化的载玻片作为固相载体，将步骤(1)中以壳聚糖分散的金纳米粒子溶液滴涂于载玻片表面并置于4℃下晾干后，将待测抗原对应上述步骤(2)中所制得的包被抗原滴涂于该晾干后的载玻片表面，再将该载玻片置于4℃下反应过夜，然后将其冲洗干净后，用牛血清蛋白将该载玻片上的剩余活性位点封闭，即为免疫传感器。