[发明专利]一种化合物皮肤致敏体外评估细胞模型及其构建方法有效
| 申请号： | 201711335463.3 | 申请日： | 2017-12-14 |
| 公开（公告）号： | CN108103098B | 公开（公告）日： | 2020-07-28 |
| 发明（设计）人： | 黄黎珍;钟国瑞;李浩健;谢水林;庞士慧;白静;何昌生;都心怡;张琪霄;王海杰;杜红丽 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90;C12N5/10;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 崔红丽 |
| 地址： | 511458 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开一种化合物皮肤致敏体外评估细胞模型及其构建方法。该细胞模型的构建方法包括如下步骤：利用CRISPR/Cas9设计并构建sgRNA表达载体；设计并构建能将连接自裂解肽序列的报告基因定点敲入HMOX1基因的表达框内的同源重组载体；将同源重组载体，与hCas9质粒、sgRNA表达载体共转染细胞，进行单克隆化扩大培养，即得细胞模型。本发明通过CRISPR/CAS9结合细胞单克隆技术，获得HMOX1基因终止密码子前敲入荧光素酶基因的HaCaT细胞模型。该细胞模型实现荧光素酶基因与HMOX1基因的同步表达，从而有效分辨致敏化合物和非致敏化合物，为化合物致敏性研究提供更特异，更灵敏的细胞模型。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 化合物 皮肤 体外 评估 细胞 模型 及其 构建 方法 | ||
【主权项】：
1.一种CRISPR/CAS9介导HMOX1基因靶向性敲入报告基因的细胞模型的构建方法，其特征在于包括如下步骤：(1)利用CRISPR/Cas9设计对HMOX1基因靶点特异性的sgRNA，并构建sgRNA表达载体；(2)设计并构建能将连接自裂解肽序列的报告基因定点敲入HMOX1基因的表达框内的同源重组载体；(3)将构建的同源重组载体，与hCas9质粒、sgRNA表达载体共转染哺乳动物的角质细胞、树突状细胞或单核细胞，进行单克隆化扩大培养，即得HMOX1基因靶向性敲入报告基因的细胞模型。
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