[发明专利]用于心肌细胞分离提纯的密度梯度液试剂盒及使用方法

摘要

本发明公开了一种用于心肌细胞分离提纯的密度梯度液试剂盒及使用方法，涉及生物细胞培养技术领域，试剂盒包括第一试剂、第二试剂，其中：第一试剂包括超纯水、Percoll液和缓冲液，其体积比为1：3：1；第二试剂包括超纯水、Percoll液和缓冲液，其体积比为2：2：1；第一试剂和第二试剂中的缓冲液包括35.064‑40.032份Nacl，1.975‑2.013份Kcl，0.615‑1.107份MgSO4.7H2O，4.865‑5.226份葡萄糖，0.301‑0.384份KH2PO4，0.213‑0.365份Na2HPO4，23.830‑29.788份4‑羟乙基哌嗪乙磺酸。 1

主权项

1.一种用于心肌细胞分离提纯的密度梯度液试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括第一试剂、第二试剂，其中：

所述第一试剂包括超纯水、Percoll液和缓冲液，其体积比为1：3：1；

所述第二试剂包括超纯水、Percoll液和缓冲液，其体积比为2：2：1；

所述第一试剂和第二试剂中的缓冲液包括35.064‑40.032份Nacl，1.975‑2.013份Kcl，0.615‑1.107份MgSO₄.7H₂O，4.865‑5.226份葡萄糖，0.301‑0.384份KH₂PO₄，0.213‑0.365份Na₂HPO₄，23.830‑29.788份4‑羟乙基哌嗪乙磺酸。

2.如权利要求1所述的一种用于心肌细胞分离提纯的密度梯度液试剂盒，其特征在于：所述缓冲液还包括超纯水和NaOH，所述缓冲液用超纯水定容，用NaOH调整PH至7.5。

3.如权利要求1所述的一种用于心肌细胞分离提纯的密度梯度液试剂盒，其特征在于：所述第一试剂和所述第二试剂用于配制密度梯度液，所述密度梯度液用于使含有心肌细胞与非心肌细胞的细胞悬液分层。

4.一种如权利要求1‑3任意一项所述的用于心肌细胞分离提纯的密度梯度液试剂盒的使用方法，其特征在于：

S1，剪下的心脏组织置于装有心肌缓冲液的离心管中；

S2，将0.05％Ⅱ型胶原酶加入离心管中，摇床培养，弃上清；

S3，将0.1％Ⅱ型胶原酶加入步骤S2处理后的离心管中，摇床培养，取上清放入血清中混匀；

S4，对上清液与血清的混合液进行过滤、离心，离心后用心肌缓冲液重悬，将细胞悬液加入离心管中；

S5，使用所述第一试剂和所述第二试剂配制密度梯度液，将细胞悬液缓慢加入配好的密度梯度液中，进行离心；离心后可见液面分层，吸出中间层。

5.如权利要求4所述的用于心肌细胞分离提纯的试剂盒的使用方法，其特征在于：所述心肌缓冲液包括7.012‑8.007份Nacl，0.395‑0.403份Kcl，0.123‑0.222份MgSO₄.7H₂O，0.973‑1.046份葡萄糖，0.060‑0.077份KH₂PO₄，0.042‑0.071份Na₂HPO₄，4.766‑5.958份4‑羟乙基哌嗪乙磺酸；所述心肌缓冲液用超纯水定容，用NaOH调整PH至7.5。

6.如权利要求4所述的用于心肌细胞分离提纯的密度梯度液试剂盒的使用方法，其特征在于：使用所述第一试剂和所述第二试剂按体积比4:5配制所述密度梯度液。

7.如权利要求4所述的用于用于心肌细胞分离提纯的密度梯度液试剂盒的使用方法，其特征在于：所述密度梯度液配制方法为：将第一试剂悬空滴加入离心管中，再缓慢加入第二试剂。