[发明专利]同时检测七种水仙RNA病毒的多重RT-PCR检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了同时检测七种水仙RNA病毒的多重RT‑PCR检测试剂盒及其检测方法。本发明的试剂盒可专用于同时检测水仙黄条病毒、水仙退化病毒、水仙潜隐病毒、南芥菜花叶病毒、水仙普通潜隐病毒、水仙花叶病毒和尼润潜隐病毒，该试剂盒包括多重RT‑PCR特异性引物、随机引物、RT Buffer、RNA酶抑制因子、反转录酶、Taq PCR Mix、阳性及阴性对照品。通过实验证明：本发明的特异性引物不仅具有特异性好、灵敏度高、高通量和结果准确的优点，而且检测方法操作简便，无需克隆、测序和序列比对的步骤，显著提高了检测效率，节约了检测时间和成本，可以有效用于七种水仙RNA病毒的快速、准确鉴定，应用前景广泛。

主权项

用于鉴定七种水仙RNA病毒的成套引物对，由用于鉴定水仙黄条病毒的特异引物对A、用于鉴定水仙退化病毒的特异引物对B、用于鉴定水仙潜隐病毒的特异引物对C、用于鉴定南芥菜花叶病毒的特异引物对D、用于鉴定水仙普通潜隐病毒的特异引物对E、用于鉴定水仙花叶病毒的特异引物对F和用于鉴定尼润潜隐病毒的特异引物对G组成；所述特异引物对A由引物NYSV‑F和引物NYSV‑R组成；所述特异引物对B由引物NDV‑F和引物NDV‑R组成；所述特异引物对C由引物NLV‑F和引物NLV‑R组成；所述特异引物对D由引物ArMV‑F和引物ArMV‑R组成；所述特异引物对E由引物NCLV‑F和引物NCLV‑R组成；所述特异引物对F由引物NMV‑F和引物NMV‑R组成；所述特异引物对G由引物NeLV‑F和引物NeLV‑R组成。所述引物NYSV‑F为如下a1)或a2)：a1)序列表中序列1所示的单链DNA分子；a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的单链DNA分子；所述引物NYSV‑R为如下a3)或a4)：a3)序列表中序列2所示的单链DNA分子；a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的单链DNA分子；所述引物NDV‑F为如下b1)或b2)：b1)序列表中序列3所示的单链DNA分子；b2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子；所述引物NDV‑R为如下b3)或b4)：b3)序列表中序列4所示的单链DNA分子；b4)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的单链DNA分子；所述引物NLV‑F为如下c1)或c2)：c1)序列表中序列5所示的单链DNA分子；c2)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子；所述引物NLV‑R为如下c3)或c4)：c3)序列表中序列6所示的单链DNA分子；c4)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的单链DNA分子；所述引物ArMV‑F为如下d1)或d2)：d1)序列表中序列7所示的单链DNA分子；d2)将序列7经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子；所述引物ArMV‑R为如下d3)或d4)：d3)序列表中序列8所示的单链DNA分子；d4)将序列8经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的单链DNA分子；所述引物NCLV‑F为如下e1)或e2)：e1)序列表中序列9所示的单链DNA分子；e2)将序列9经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子；所述引物NCLV‑R为如下e3)或e4)：e3)序列表中序列10所示的单链DNA分子；e4)将序列10经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的单链DNA分子；所述引物NMV‑F为如下f1)或f2)：f1)序列表中序列11所示的单链DNA分子；f2)将序列11经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子；所述引物NMV‑R为如下f3)或f4)：f3)序列表中序列12所示的单链DNA分子；f4)将序列12经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的单链DNA分子；所述引物NeLV‑F为如下g1)或g2)：g1)序列表中序列13所示的单链DNA分子；g2)将序列13经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子；所述引物NeLV‑R为如下b3)或b4)：g3)序列表中序列14所示的单链DNA分子；g4)将序列14经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的单链DNA分子；所述七种水仙RNA病毒为水仙黄条病毒、水仙退化病毒、水仙潜隐病毒、南芥菜花叶病毒、水仙普通潜隐病毒、水仙花叶病毒和/或尼润潜隐病毒。