[发明专利]一种间接酶联免疫抗体检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明公开了一种间接酶联免疫抗体检测试剂盒，包括抗体稀释液和酶标二抗，所述抗体稀释液包含以质量分数计的以下组分：75～95％作为溶剂体系的1×PBS缓冲液、0.1～8％的牛血清白蛋白、0.01～0.5％的硫柳汞钠、0.05～5％的抗凝剂、0.1～15％的非常规性饲养动物血清以及0.05～2％的青链霉素双抗；所述酶标二抗的稀释度为1：(500‑10000)。本发明还公开了一种间接酶联免疫抗体检测方法。本发明能降低普通酶联免疫检测方法的阴性背景，提高检测方法的信噪比和检测方法的灵敏度。

主权项

1.一种间接酶联免疫抗体检测试剂盒，其特征在于，包括抗体稀释液和酶标二抗，所述抗体稀释液包含以质量分数计的以下组分：75～95％作为溶剂体系的1×PBS缓冲液、0.1～8％的牛血清白蛋白、0.01～0.5％的硫柳汞钠、0.05～5％的抗凝剂、0.1～15％的非常规性饲养动物血清以及0.05～2％的青链霉素双抗；所述酶标二抗的稀释度为1：(500‑10000)。

2.如权利要求1所述的间接酶联免疫抗体检测试剂盒，其特征在于，所述酶标二抗为HRP过氧化氢酶或ALP碱性磷酸酶标记的羊抗猪、羊抗兔、羊抗鼠、兔抗猪、兔抗鼠中的一种。

3.如权利要求1或2所述的间接酶联免疫抗体检测方法，其特征在于，所述抗体稀释液包含以质量分数计的以下组分：85～92％作为溶剂体系的1×PBS缓冲液、0.1～5％的牛血清白蛋白、0.1～0.3％的硫柳汞钠、0.1～2％的抗凝剂、3～8％的非常规性饲养动物血清以及0.1～1％的青链霉素双抗。

4.如权利要求1或2任一项所述的间接酶联免疫抗体检测方法，其特征在于，所述抗体稀释液包含以质量分数计的以下组分：91％作为溶剂体系的pH7.2的1×PBS缓冲液、2.0％的牛血清白蛋白、0.2％的硫柳汞钠、1.0％的抗凝剂、5.0％的非常规性饲养动物血清以及0.8％的青链霉素双抗。

5.如权利要求1或2任一项所述的间接酶联免疫抗体检测方法，其特征在于，所述抗凝剂为肝素或乙二胺四乙酸二钠；所述非常规性饲养动物血清为骆驼、驼鹿、羊驼、马、鸵鸟、鸽、牦牛等动物血清中的一种或两种混合。

6.如权利要求1或2所述的间接酶联免疫抗体检测方法，其特征在于，所述1×PBS缓冲液包含80.0g/L NaCl、2.0g/L KCl、29.0g/L Na₂HPO₄·12H₂O和2.0g/L KH₂PO₄。

7.一种间接酶联免疫抗体检测方法，其特征在于，包括

配置PBS缓冲液的步骤：配制1×PBS缓冲液；

配置稀释液：将牛血清白蛋白、硫柳汞钠、乙二胺四乙酸二钠溶于洁净灭菌的容器中，加入灭菌蒸馏水溶解，然后用加好脱脂棉的一次性注射器将非常规性饲养动物血清缓慢过滤至容器中，再用灭菌量筒量取上述PBS缓冲液，充分搅拌混匀后，用NaOH溶液调节pH值，然后继续加蒸馏水搅拌均匀，最后加入青链霉素双抗，得到抗体稀释液；

酶标二抗稀释步骤：在上述抗体稀释液中加入酶标二抗，充分搅拌均匀，得到酶标二抗稀释液；

间接酶联免疫抗体检测步骤：分别用上述酶标二抗稀释液稀释阴性标准和阳性血清，然后将稀释好的阳性血清加样到预先包被的ELLSA板上，室温孵育后洗涤，用1×洗涤液将微孔板洗涤后拍干；再加入酶标二抗稀释液，室温孵育后重复上述洗涤步骤一次；每孔加入底物，避光显色，最后每孔加入终止液，并用酶标仪在450nm波长读数。

8.如权利要求7所述的间接酶联免疫抗体检测方法，其特征在于，所述酶标二抗稀释步骤中，酶标二抗与抗体稀释液的稀释比例为1:(500‑10000)。

9.如权利要求7所述的间接酶联免疫抗体检测方法，其特征在于，所述间接酶联免疫抗体检测步骤中，孵育时间为20‑30分钟，所述洗涤液洗涤次数为3次，洗涤液的添加量为300μL/孔，酶标二抗稀释液的加入量为100μL/孔。