[发明专利]一种菌丝健壮的杏鲍菇液体菌种的发酵方法

摘要

本发明公开了一种菌丝健壮的杏鲍菇液体菌种的发酵方法，属于杏鲍菇栽培技术领域，在液体种子、摇瓶种子、种子罐种子及发酵罐液体菌种各阶段培养基中科学复配可提高菌种抗冷、热应激性、免疫性和抗杂菌能力的中草药提取物，同时科学复配了既具有原料适应性，又具有消泡剂功能的木屑粉，并且采用追加接种和分段变温发酵的方式，缩短了菌种菌龄及增殖代数差距，适时流加包被后的具有特殊功能的壳聚糖，培养出发酵菌丝粗壮、活性高、菌丝球直径小、密度大、分布均匀的杏鲍菇液体菌种，其菌丝球密度为4.5‑5.5ⅹ10⁵个/L，菌丝球直径为0.5‑0.7mm，菌丝球干重为90‑100g/L，萌发时间为4‑5h，胞外多糖为3.0‑3.5g/L。

主权项

1.一种菌丝健壮的杏鲍菇液体菌种的发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：将保存的杏鲍菇斜面菌种经平板培养基活化后依次经液体种子培养基、摇瓶种子培养基和种子罐培养基逐级扩大培养得到种子罐种子，首先将种子罐种子以8％接种量接种于30L发酵罐，发酵培养基装液量15L,于30℃、通气量6L/min恒温发酵12h,然后以0.3℃/min的速率降温至18℃，向发酵罐中加入7g包被壳聚糖和900mL种子罐种子，在通气量6L/min条件下恒温发酵10h，最后以0.2℃/min的速率升温至24℃，在通气量5L/min条件下恒温发酵45h即得菌丝健壮的杏鲍菇液体菌种；所述发酵培养基的组成为：黄豆饼粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草药提取物1.6g/L，木屑粉0.3g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，VB1 0.01g/L，余量为水，pH值6.0；所述中草药提取物的制备方法，包括如下步骤：按重量份数计，称取黄芪30份，干姜30份，陈皮30份，牛黄25份，丹皮25份，甘草20份，知母18份，金银花18份，鱼腥草17份，赤芍15份，黄芩15份，川芎10份，当归8份；置盛有0.2％碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、30KHz清洗12min，沥干，将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下，置容器中均匀混合并添加5倍重量的水，得混合物料，控制温度80℃保持3h，接着降温至45℃，用乳酸调节pH值为4，在功率200W条件下进行微波提取12min，同时在功率250W,频率35KHz条件下进行超声波辅助提取；然后加入混合物料总重量1.0％的混合酶进行酶解，用乳酸调节pH值为6.2，酶解3h，最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物，乙醇和丙醇混合的质量比为1:2，控制温度至70℃保持3.5h，过滤，得第一滤液；添加滤渣2倍重量的水，控制温度90℃保持2h，然后降温至30℃，过滤，得第二滤液；将第一滤液和第二滤液按照质量比3:2合并,滤液真空浓缩后冷冻干燥、粉碎即得中草药提取物；所述混合酶为葡聚糖酶、木聚糖酶、戊聚糖酶、果胶酶按质量比3:2:2:1均匀混合；所述木屑粉的制备方法包括如下步骤：将无发霉、无病虫锯木末或废木屑除去杂物，置于装有质量百分比浓度0.5％的碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、30KHz清洗10min，冲洗、沥干，放入蒸汽釜中于0.3-0.4MPa蒸煮20-30min,取出，沥干，与植物油按质量比100:1均匀混合，然后将混合物置微波干燥机于2000W、120℃微波辐照5min，最后超微粉碎至粒径0.3-0.5mm,密封包装即得木屑粉；所述发酵培养基的制备方法为：按照培养基配方准确称量各原料，首先取黄豆饼粉质量4倍的水，用乳酸调节pH值为5，加入5u/g黄豆饼粉的耐高温a-淀粉酶,边搅拌边加入黄豆饼粉，升温至90℃，保温，液化10min,然后降温至50℃，保温，边搅拌边加入40u/g黄豆饼粉的糖化酶和30u/g黄豆饼粉的蛋白酶水解20min，边搅拌边加入剩余水和其它原料，均匀混合，调整pH值为6.0，123℃灭菌30min即得发酵培养基；所述包被壳聚糖的制备方法包括如下步骤：取壳聚糖加入其质量30-50％的质量百分比浓度为10-12％的α-环状糊精水溶液中，制成软材，用10-20目筛制粒，得湿颗粒，置微波干燥机中于功率2000W、60-80℃干燥4-6min，用10-20目筛快速整粒即得包被壳聚糖；所述液体种子培养基组成为：葡萄糖30g/L，酵母浸出汁5g/L，蛋白胨2g/L，琼脂2g/L，中草药提取物0.3g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，木屑粉0.1g/L，VB1 0.01g/L，余量为水，pH值6.0；所述摇瓶种子培养基组成为：黄豆饼粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草药提取物0.5g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，木屑粉0.2g/L，VB1 0.01g/L，余量为水，pH值6.0；所述种子罐培养基组成为：黄豆饼粉60g/L，葡萄糖10g/L，蛋白胨5g/L，中草药提取物0.9g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.5g/L，木屑粉0.3g/L，VB1 0.01g/L，余量为水，pH值6.0；