[发明专利]一种基于光控酶级联反应的酸性磷酸酶活性检测方法

摘要

一种基于光控酶级联反应的酸性磷酸酶活性检测方法。本发明通过利用天然酶催化反应原位产生的光活性纳米材料，建立了一种新型的酶级联催化反应体系。即酸性磷酸酶的催化产物能原位结合到二氧化钛纳米粒子的表面，形成光活性纳米材料；该光活性纳米材料能够在可见光的照射下活化辣根过氧化物酶催化氧化其特征底物的反应，从而形成了可以通过光照的控制实现精准调控的酶级联催化体系。该新型的光控制酶级联催化体系能够实现高效的三重信号放大作用，实现了酸性磷酸酶的简便、高灵敏、高选择性测定。该体系检测ALP活性的检测限可达1.0mU/L。

主权项

1.一种基于光控酶级联反应的酸性磷酸酶活性检测方法，其特征在于：a、二氧化钛纳米材料的制备：0℃下将1.0‑1.5mL的四氯化钛缓慢加入到10mL的去离子水中，搅拌之后得到白色的溶液，然后加热得到乳白色的二氧化钛悬浮液；所得到的悬浮液过滤洗涤，得到的产品烘干得到二氧化钛纳米材料的固体粉末；b、酸性磷酸酶活性的测定：在微孔板中加入10μL不同浓度的酸性磷酸酶与10μL酸性磷酸酶的底物溶液在pH＝6.0的醋酸缓冲溶液中混合摇匀后，37℃下振荡孵育1h；随后加入10μL0.15mg/mL的TiO₂纳米粒子溶液、40μL0.4g/L的辣根过氧化物酶、100μLpH为4.0的40mmol/L的醋酸缓冲溶液以及20μL辣根过氧化物酶的特征底物溶液，混合均匀后将微孔板放置于发射波长λ≥400nm的氙灯下照射15min，在酶标仪上测定体系的吸光度。