[发明专利]一种肌肉蛋白纯化方法在审
| 申请号： | 201711389690.4 | 申请日： | 2017-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN109942692A | 公开（公告）日： | 2019-06-28 |
| 发明（设计）人： | 王锡昌;张龙;樊震宇;党连魁 | 申请（专利权）人： | 上海海洋大学 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C07K1/34 |
| 代理公司： | 上海森华专利代理事务所(特殊普通合伙) 31318 | 代理人： | 谭建文 |
| 地址： | 200120 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 一种肌肉蛋白纯化方法，通过不同的溶液基质对分离纯化的影响：调节KCl、ATP、硫酸铵（A.S.）浓度，以ATPase活性为蛋白质变性指示参数，分析各肌原纤维蛋白组分的解离与析出规律，并确定肌动蛋白、肌球和副肌球蛋白的分离纯化条件；其有益效果为：相比传统蛋白纯化方法，新方法纯化出的蛋白变性程度小，纯化过程简单，通过梯度溶解和分级沉淀，高效的纯化出水产无脊椎动物平滑肌中的肌动蛋白、肌球蛋白和副肌球蛋白，最大限度的节约了纯化成本。 | ||
| 搜索关键词： | 副肌球蛋白 分离纯化 肌动蛋白 肌肉蛋白 硫酸铵 肌原纤维蛋白 蛋白质变性 无脊椎动物 析出 蛋白变性 蛋白纯化 分级沉淀 肌球蛋白 溶液基质 指示参数 平滑肌 肌球 解离 溶解 水产 节约 分析 | ||
【主权项】：
1.一种肌肉蛋白纯化方法，其步骤在于：步骤一：对肌肉进行的预处理，将新鲜原料的闭壳肌切断，除去体腔液，进一步将足肌分割下来，收集足肌组织，装袋后放置于冰上待用；步骤二：所述的样品肌肉转移到10倍体积的0.1M KCl，20mM Tris‑HCl(PH 7.5)缓冲液中，利用高速分散均质机均质1min，在高速冷冻离心机12000g下离心10min，重复洗脱三次，收集沉淀；步骤三： 用0.1M KCl，20mM Tris‑HCl(PH 7.5)缓冲液将沉淀悬浊后经双层纱布过滤，滤去基质蛋白，滤液即为肌原纤维蛋白组分。
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