[发明专利]一种利用霸王柴无菌苗快速增殖培养无性系的方法

摘要

本发明涉及一种利用霸王柴无菌苗快速增殖培养无性系的方法，属于无性繁殖技术领域。本发明通过对种子浸泡和消毒、无菌苗培养、诱导愈伤组织培养、不定芽分化培养和生根培养各条件的设置，得到的霸王柴生根率高、增殖倍数高的霸王柴，解决了霸王柴种子育苗效率低下且易受环境因素影响繁殖慢的难题，该方法简单易行，成本低廉，增殖与生根效率高，适用于工厂化大规模生产。

主权项

1.一种利用霸王柴无菌苗快速增殖培养无性系的方法，包括以下步骤：1)采用GA3溶液和水对霸王柴种子依次进行浸泡，所述浸泡重复2次，得到浸泡种子；2)将步骤1)得到的浸泡种子在体积浓度为75％的乙醇溶液中进行消毒，所述消毒的时间为40s，得到消毒种子；3)将步骤2)得到的消毒种子在无菌苗培养基中进行无菌苗培养15～20d，得到无菌苗；所述无菌苗培养基以改良MS培养基为基准，包括0.3mg/L的GA3、5g/L的琼脂和30g/L的蔗糖，pH值为5.8～6.0；4)由所述步骤3)得到的无菌苗获得外植体，将所述外植体在诱导愈伤组织培养基上进行诱导愈伤培养25～30d，得到愈伤组织；所述外植体包括茎段、叶片和/或胚轴；所述诱导愈伤培养基以改良MS培养基为基准，包括0.1～0.2mg/L的6-BA、0.3～0.5mg/L的NAA和30g/L的蔗糖，pH值为5.8～6.0；5)将所述步骤4)得到的愈伤组织在第一不定芽分化培养基中进行第一分化培养6～8d，再将所述第一分化培养产物在第二不定芽分化培养基中进行第二分化培养25～30d，得到不定芽；所述第一不定芽分化培养基以改良MS培养基为基准，包括3.0mg/L的KT、0.5mg/L的NAA和4.5g/L的琼脂，pH值为5.8～6.0；所述第二不定芽分化培养基以改良MS培养基为基准，包括3.0mg/L的KT、0.5mg/L的NAA、20g/L的蔗糖和4.5g/L的琼脂，pH值为5.8～6.0；6)将所述步骤5)得到的不定芽在生根培养基中进行生根培养，得到霸王柴植株；所述生根培养基以改良MS培养基为基准，包括0.3mg/L的IBA和10g/L的蔗糖；所述改良MS培养基为无机盐减少1/3的MS培养基。