[发明专利]一种MDCK悬浮细胞的制备方法

摘要

本发明涉及细胞培养领域，特别涉及一种MDCK悬浮细胞的制备方法，包括以下步骤MDCK细胞依次用胎牛血清含量为8％、5％、2％的DMEM/F12培养基传代培养；然后依次用DMEM/F12培养基与低血清培养基按照体积比为11、15、01混合培养液培养，消化、离心，得到的细胞用低血清培养基以转速为20‑30r/min进行摇床培养，逐步提高摇床转速，至得到完全失去黏附瓶壁能力的细胞，即为低血清悬浮培养的细胞株；收集细胞，逐步提高无血清培养基的含量，生长稳定后，得到无血清悬浮培养的MDCK细胞。该方法通过大量实验逐渐摸索得到，该方法简便，易于工厂化生产。

主权项

一种MDCK悬浮细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：MDCK细胞用胎牛血清含量为8％的DMEM/F12培养基传代培养3次；用胎牛血清含量为5％的DMEM/F12培养基传代培养5次；用胎牛血清含量为2％的DMEM/F12培养基传代培养5次；用DMEM/F12培养基与低血清培养基按照体积比为1:1混合培养液培养，其中新生牛血清含量为2％，传代培养7次；用DMEM/F12培养基与低血清培养基按照体积比为1:5混合培养液培养，其中新生牛血清含量为2％，传代培养6次；用低血清培养基传代培养5次；消化、离心，得到的细胞用低血清培养基以转速为20‑30r/min进行摇床培养，测定葡萄糖含量，低于1g/L进行换液，待细胞比生长速率稳定后，每次传代前密度调整为约4.8×105‑5.2×105cells/ml，并逐步提高摇床转速，至得到完全失去黏附瓶壁能力的细胞，即为低血清悬浮培养的细胞株；收集细胞，然后采用低血清培养基与无血清培养基的混合液培养，并逐步提高无血清培养基的含量，生长稳定后，得到无血清悬浮培养的MDCK细胞。