[发明专利]一种生姜脱毒组织培养方法

摘要

本发明公开了一种生姜脱毒组织培养方法，包括如下步骤（1）选材选取无腐无病害、健壮生姜块茎；（2）催芽将选取好的生姜块茎进行催芽；（3）茎尖脱毒将生姜芽外植体进行清洗、消毒、剥离接种至培养基Ⅰ上进行培养；（4）增殖继代将无菌苗将其接种到相应培养基上进行增殖继代培养；（5）生根培养；（6）驯化炼苗。本发明的有益效果是生姜通过组织培养，可以起到脱毒、快繁、种质资源保存、品质改良的作用，大幅度提高了生姜质量和品质；确定了组织培养中控制分化、继代生长、生根等的培养基成分，研究确定了生长调节物质的种类、浓度以及培养条件的最佳优化选择，攻克了生姜组织培养过程中的技术壁垒，达到很好的培养效果。

主权项

一种生姜脱毒组织培养方法，其特征在于：包括：（1）选材：选取无腐无病害、健壮生姜块茎；（2）催芽：将选取好的生姜块茎置于无光照室内，维持温度25~30℃，湿度40~50%，放置7~10d，此时生姜芽外植体1~2cm；（3）茎尖脱毒：将步骤（2）中得到的生姜芽外植体采用流水冲洗干净，将其浸入吐温‑80水溶液中10~20min，随后用流动水将吐温‑80冲洗干净；将处理好的芽外植体采用75%酒精消毒1~5min，1%HgCl溶液消毒10~20min；剥离茎尖；将剥离好的茎尖接种至培养基Ⅰ上，放置于温度25~28℃、每天光照7~12h、光照强度为2500~3500Lux的培养环境中，培养40~60d；（4） 增殖、继代：选取步骤（3）中得到的无菌苗将其接种到培养基Ⅱ上进行增殖培养，培养条件为：温度25~26℃、每天光照10~12h、光照强度为3000~5000Lux、培养20~30d；在培养基Ⅲ上重复上述增殖过程；（5）生根：选取长势健壮的株高2~3cm的生姜苗，将其接种至培养基Ⅳ中，放置于温度25~26℃、每天光照10~12h、光照强度为5000~7000Lux的环境中，培养20d；（6）驯化炼苗：将步骤（5）得到的根系发达，株高8~10cm的生姜苗转移到小温棚中进行驯化，遮荫，保持小温棚中温度为25~26℃，7天后逐渐递减至18~20℃，15天后将生姜苗从组织培养基中去除，将根部的培养基清洗干净，种植到基质土中；其中：培养基Ⅰ为B5培养基中添加0.5mg/LIBA、1.0mg/LKT、0.5mg/L活性炭、30%蔗糖和4.5g/L琼脂；培养基Ⅱ为B5培养基中添加2.0mg/LKT、0.5mg/LNAA、30%蔗糖和4.5g/L琼脂；培养基Ⅲ为B5培养基中添加0.1mg/LNAA、0.5mg/LKT、30%蔗糖和4.5g/L琼脂；培养基Ⅳ为B5培养基中添加0.5mg/LIBA、20%蔗糖和4.5g/L琼脂。