[发明专利]一种全悬浮细胞培养重组禽流感亚型病毒的方法

摘要

本发明涉及禽流感病毒疫苗制备领域，特别涉及一种全悬浮细胞培养重组禽流感亚型病毒的方法，包括以下步骤：重组禽流感亚型病毒鸡胚种毒接种于MDCK单层细胞驯化培养，收获的培养物接种，以此重复培养，培养至重组禽流感亚型病毒增殖速度稳定，病毒含量≥107.5EID50；然后接入悬浮细胞；培养至细胞病变达75％以上时收获病毒液，即得。本发明先将鸡胚种毒接种于MDCK单层细胞驯化培养，再接种于悬浮MDCK细胞，有效增加生产得到的悬浮毒的性能稳定性，得到的悬浮毒HA≥1:1024，每0.1ml病毒含量≥108.0EID50，每1ml病毒含量≥108.0TCID50。

主权项

1.一种全悬浮细胞培养重组禽流感亚型病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)重组禽流感亚型病毒鸡胚种毒接种于MDCK单层细胞培养，接种量为0.1％‑3％，所述重组禽流感亚型病毒鸡胚种毒效价不低于1:512，每0.1ml病毒含量≥107.5EID50，所述MDCK单层细胞采用含有TPCK‑胰酶的DMEM培养基培养，当细胞病变率达到80％以上，病毒效价不低于1∶512时收获培养物；(b)收获的培养物按照步骤(a)接种，以此重复培养，培养至重组禽流感亚型病毒增殖速度稳定，病毒含量≥107.5EID50，得到驯化的重组禽流感亚型病毒鸡胚种毒；(c)对数生长期的悬浮MDCK细胞调整细胞密度为3.0×106.0～4.0×106.0个/ml，按MOI感染复数10‑3～10‑4接入所述驯化的重组禽流感亚型病毒鸡胚种毒；(d)培养至细胞病变达75％以上时收获病毒液，即得。