[发明专利]一种工业化生产凝乳酶的方法

摘要

本发明公开一种工业化生产凝乳酶的方法，步骤是用原始菌株作传代菌株制备；活化液培养；种子培养；发酵种子培养；发酵培养；发酵结束，检测参数，放料离心处理，得到湿菌体；湿菌体溶解，再清洗，然后离心收集；菌体悬浮液破碎，离心收集包涵体；包涵体经过复性，得到粗制凝乳酶液；粗制凝乳酶液经过膜过滤、加水洗脱，微滤除杂、超滤浓缩、除菌过滤得到无菌液态产品。本发明的工业化生产凝乳酶的方法，1、发酵工艺简单，高密度发酵产量大，成本低；2、细胞破碎工艺减少了固体菌渣带来的环境污染问题；3、膜处理技术效率高，成本低，易操作，减少了传统物理化学工艺带来的产品二次污染问题；4、除菌工艺对产品的保存有极大的作用。

主权项

一种工业化生产凝乳酶的方法，其特征在于，该方法的步骤是：S1、以来源于大肠杆菌K‑12的发酵菌株为原始菌株；S2、传代菌株制备：将原始菌株划线在固体平板上，28‑30℃恒温培养箱用固定平板培养基培养24‑30小时；S3、活化液培养：从平板内挑选单菌落分别接入准备好的三角瓶中，用活化培养基培养，28‑30℃、180rpm摇床，16‑24小时；S4、种子培养：从活化液中挑选长势较好的菌落转接到大瓶培养，扩大种量，接种量按照1％‑2％接种,用种子培养基培养，28‑30℃、180rpm摇床培养，活化转接要求OD值为2‑5，培养时间8‑12h；S4、发酵种子培养，用饱和蒸汽对发酵种子培养基进行灭菌消毒，降温到35‑38℃，接种量按照1％‑2％接种，开启搅拌220rpm，调节通气量1:1VVM，氢氧化钠调节PH值控制在6.7‑7.5，培养时间8‑12h，控制OD值在2‑5转接；S5、发酵培养：按照接种量1％‑1.5％接入发酵培养基中，在36‑37℃，开启搅拌,通气量按照溶氧条件调节，培养18‑24小时；S6、发酵结束，检测菌体含量、湿重、OD值，放料离心处理，收集得到湿菌体，并计重；S7、湿菌体MEDT溶解，再用EDTA缓冲液清洗菌体，然后离心收集菌体，计重后用EDTA溶解成悬浮液；S8、菌体悬浮液在800‑1000Bar高压均质机破碎2次以上，检测OD值在50‑65左右时，再次离心收集包涵体；S9、包涵体经过复性，得到粗制凝乳酶液；S10、粗制凝乳酶液经过膜过滤、加水洗脱，微滤除杂、超滤浓缩、除菌过滤得到无菌液态产品；S11、根据客户需求用无菌水配制要求的酶活。