[发明专利]从海洋生物蛋白资源中提取分离小分子活性肽的联用工艺

摘要

本发明公开了从海洋生物蛋白资源中提取分离小分子活性肽的联用工艺,（1）海洋生物蛋白经酶解制得酶解液（2）海洋生物蛋白酶解液采用膜分离技术进行粗分离，获得小分子活性肽，（3）小分子活性肽经葡聚糖凝胶色谱分离，获得各个组分（4）获得各个组分分别经离子交换色谱进一步分离，获得不同组分的分离产物（5）分离产物经反向高效液相色谱纯化，最终得到一系列的小分子活性多肽化合物。本发明技术路线简单可行，易于实现，可直接从多种海洋蛋白资源中获得一系列的小分子活性多肽化合物，有助于开展不同来源不同类型的小分子活性肽化合物的结构鉴定、药理活性研究、构效关系研究及计算机模拟药物的筛选等研究工作。

主权项

1.从海洋生物蛋白资源中提取分离小分子活性肽的联用工艺，其特征在于，包括以下步骤：步骤(一)、海洋生物蛋白酶解液的制备：海洋水产品加水匀浆或者干燥粉碎后，加入4-20 倍体积的水，然后加入总液体体积0.2％-0.5%的复合蛋白酶，在40-50℃下酶解3-6小时，酶反应pH 值控制在1-10，酶解结束后升温灭酶，得到海洋水产品蛋白酶解液；步骤(二)、海洋生物蛋白酶解液的粗分离：将步骤（一）获得的蛋白酶解液离心去除颗粒状物质，然后采用膜分离技术进行粗分离，过滤液冷冻干燥得小分子活性肽粉；步骤(三)、小分子活性肽的凝胶柱色谱分离：将步骤（二）中的小分子活性肽粉溶解于纯水中，用凝胶柱色谱进行分离，收集不同组分；步骤（四）：小分子活性肽的离子交换色谱分离：步骤（四）得到不同组分分别进行离子交换柱层析分离，采用不同浓度的盐溶液洗脱，收集不同组分的分离产物；步骤（五）：小分子活性肽的高效液相色谱纯化：步骤（四）中分离产物经脱盐后，采用高效液相色谱进行纯化，色谱柱为C18，流动相A为乙腈，流动相B为含0.05%-0.5%三氟乙酸的纯水，采用不同浓度的流动相A和流动相B等度或者梯度洗脱，收集色谱峰，冷冻干燥即得小分子活性肽化合物。