[发明专利]一种利用蛋白质酶切位点形成包涵体并制备小肽的方法

摘要

本发明涉及一种利用蛋白质酶切位点形成包涵体并制备小肽的方法，利用基因工程技术将识别序列为芳香族氨基酸的蛋白酶酶切位点分别置于目标小肽的两端，通过提高最终表达蛋白质中的芳香族氨基酸含量促使蛋白质以包涵体形式表达；通过包涵体形式低成本获得目标蛋白质，将蛋白质变性处理后利用选定的蛋白酶进行切割，从酶切产物中分离纯化获得目标功能小肽。将蛋白质酶切技术与包涵体技术整合，降低功能小肽的生产成本，为功能小肽的产业开发提供可行之路。 1

主权项

1.一种利用蛋白质酶切位点形成包涵体并制备小肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.设计目标小肽编码序列，将编码芳香族氨基酸的序列分别置于目标小肽的两端，组成小肽编码单元；

S2.将小肽编码单元串联在一起，串联的小肽编码单元再与荧光蛋白基因连接在一起获得融合基因，其中，串联小肽单元与荧光蛋白基因之间不使用长间隔序列；

S3.将融合基因与大肠杆菌表达载体进行重组，转化大肠杆菌并优化表达条件使融合基因以包涵体形式表达，通过包涵体分离获得含有目标小肽的多肽链；

S4.将含有目标小肽的多肽链用蛋白酶进行氨基酸序列切割，在酶切产物中分离纯化目标小肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S2中，在串联小肽编码单元之间可增加芳香族氨基酸的编码序列。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中，将包涵体变性处理并利用蛋白酶水解变性后的包涵体从而释放出多肽链。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，荧光蛋白基因为绿色荧光蛋白基因。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4中多肽链切割所用蛋白酶为固定化酶。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S4所述蛋白酶为糜蛋白酶或内肽酶Asp‑N。