[发明专利]紫芝黑豆溶栓酶的制备方法

摘要

本发明公开的紫芝黑豆溶栓酶的制备方法，以紫芝为生产菌株，以黑豆为培养基，采用固态发酵的方法，其紫芝溶栓酶有强烈的溶血栓活性，活性中心存在丝氨酸残基，为丝氨酸蛋白酶、胰蛋白酶属，是一种新发现的溶栓酶，具有提高免疫力的功效，并适用于免疫力低及其引起的症状；既保留了黑豆的营养成份，使用后又可增强人体肠道功能，具有很好的经济效益和市场前景。

主权项

1.紫芝黑豆溶栓酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：包含紫芝黑豆的固态发酵过程和酶的分离纯化过程；其中，紫芝黑豆的固态发酵过程包括：①菌种活化将紫芝菌丝体均匀涂布在斜面培养基表面培养；②种子培养将黑豆匀浆加水煮沸，制成种子培养基，将步骤①中获得的活化紫芝菌种接种至种子培养基摇瓶培养；③将黑豆制成固体发酵培养基；④发酵产酶将步骤②获得的种子培养基接种至步骤③获得的固体发酵培养基获得固体发酵物料；酶的分离纯化过程包括：i、酶的分离取紫芝黑豆的固态发酵过程中获得的固体发酵物料，加入0.1～0.2mol/L、pH7～8的磷酸钠缓冲液从发酵物料中提取酶，其液比是1∶3～6，搅拌2～4小时后，离心、取上清液为粗酶液；ii、酶的纯化将步骤i获得的粗酶液进行Sephadex G-50柱层析和CMC离子交换柱层析，用离子强度pH线性梯度洗脱，收集具有溶栓酶活性的洗脱液部分，获得纯化的紫芝黑豆溶栓酶。