[发明专利]金属离子传感器和检测金属离子的方法

摘要

本申请提供了金属离子传感器和检测金属离子的方法。特别地，本申请提供了一种多肽金属离子传感器，所述多肽金属离子传感器包含具有异源金属离子结合位点的工程化绿色荧光多肽(GFP)，其中所述工程化GFP为具有与氨基酸序列SEQ ID NO：37至少90％相似性并具有在序列SEQ ID NO：37中并且选自由L22V、S175G及I218M组成的组的至少一个氨基酸取代的变体，并且所述工程化GFP当具有结合至其的金属离子物质时，具有与结合至相同的金属离子物质的多肽SEQ ID NO：37相比在37℃升高的荧光输出。本申请还提供了一种重组核酸，所述重组核酸具有与编码多肽金属离子传感器的序列具有至少95％的相似性的核苷酸序列，所述多肽金属离子传感器具有选自SEQ ID NO：65‑75和79‑82的氨基酸序列。

主权项

1.一种多肽金属离子传感器，所述多肽金属离子传感器包含具有异源金属离子结合位点的工程化绿色荧光多肽(GFP)，其中所述工程化GFP为具有与氨基酸序列SEQ ID NO：37至少90％相似性并具有在序列SEQ ID NO：37中并且选自由L22V、S175G及I218M组成的组的至少一个氨基酸取代的变体，并且所述工程化GFP当具有结合至其的金属离子物质时，具有与结合至相同的金属离子物质的多肽SEQ ID NO：37相比在37℃升高的荧光输出。

2.根据权利要求1所述的多肽金属离子传感器，其中所述传感器被缀合到特异性识别细胞的结构特征的至少一个靶向多肽基序。

3.根据权利要求1所述的多肽金属离子传感器，其中所述至少一个靶向多肽基序特异性识别细胞的内质网或肌质网的靶组分。

4.根据权利要求3所述的多肽金属离子传感器，其中所述靶向多肽基序具有与选自由序列SEQ ID NO：64、76‑78组成的组的氨基酸序列至少90％的序列同一性和序列KDEL。

5.根据权利要求1所述的多肽金属离子传感器，其中所述金属离子结合位点特异性结合选自由以下组成的组的金属离子：钙、铅、钆、镧、铽、锑、锶、镁、汞和镉。

6.根据权利要求1所述的多肽金属离子传感器，其中所述传感器的氨基酸序列具有与选自SEQ ID NO：65‑75和79‑82的序列至少90％的相似性。

7.根据权利要求6所述的多肽金属离子传感器，其中所述传感器的氨基酸序列具有与选自SEQ ID NO：65‑75和79‑82的序列至少95％的相似性。

8.根据权利要求7所述的多肽金属离子传感器，其中所述传感器的氨基酸序列具有选自SEQ ID NO：65‑75和79‑82的序列。

9.一种重组核酸，所述重组核酸具有与编码多肽金属离子传感器的序列具有至少95％的相似性的核苷酸序列，所述多肽金属离子传感器具有选自SEQ ID NO：65‑75和79‑82的氨基酸序列。

10.根据权利要求9所述的重组核酸，其中所述重组核酸可操作地插入到表达载体核酸序列中。