[发明专利]一种基于肿瘤细胞为模板的肿瘤疫苗及其制备方法

摘要

本发明公开了基于肿瘤细胞为模板的肿瘤疫苗及其制备方法，制备步骤：(1)收集处于对数生长期的肿瘤细胞，洗涤，用生理盐水调整浓度为2×10⁵个/ml‑2×10⁷个/ml的肿瘤细胞混悬液；以下各步骤在4℃以下进行；(2)向肿瘤细胞混悬液中加入EGCG水溶液和AlCl₃水溶液，涡旋，离心，洗涤，得到Cell@EGCG/Al₁，加入生理盐水；(3)重复步骤(2)n次得到Cell@EGCG/Al_(n+1)；(4)离心去上清，将Cell@EGCG/Al_(n+1)用高纯水孵育使细胞灭活，离心，得到肿瘤疫苗；本发明保证了肿瘤细胞裂解物的活性及疫苗的使用安全性；原料廉价易得，制备工艺简单易行。抗原负载量高。

主权项

1.基于肿瘤细胞为模板的肿瘤疫苗的制备方法，其特征是包括如下步骤：1)收集处于对数生长期的肿瘤细胞，并用生理盐水洗涤以去除细胞培养基中血清，用生理盐水将细胞浓度调整为2×10⁵个/ml‑2×10⁷个/ml的肿瘤细胞混悬液；以下各步骤在4 ^oC以下进行；2)按比例，向9mL肿瘤细胞混悬液中加入0.5ml，10‑30 mg/ml的EGCG水溶液和0.5ml，2‑8 mg/ml的AlCl₃水溶液，涡旋，离心，用生理盐水洗涤去除溶液中多余的EGCG和AlCl₃，得到EGCG/Al包埋的肿瘤细胞Cell@EGCG/Al₁，再加入生理盐水至9mL；（3）重复步骤（2）n次得到Cell@EGCG/Al_(n+1)；（4）离心去上清，将Cell@EGCG/Al_(n+1)用高纯水孵育使细胞灭活，离心，得到肿瘤疫苗，即包埋有肿瘤细胞裂解物的微囊TCL@EGCG/Al_(n+1)；所述n=0‑2；所述EGCG是表没食子儿茶素没食子酸酯的缩写；所述肿瘤细胞为小鼠黑色素瘤细胞B16或人急性白血病细胞HL‑60。