[发明专利]湿加松体细胞胚拯救的方法有效
| 申请号： | 201711438243.3 | 申请日： | 2017-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN107996405B | 公开（公告）日： | 2019-12-17 |
| 发明（设计）人： | 郭文冰;赵奋成;胡继文;司徒荣贵;彭冠明;王为民;黄婷;邓乐平;廖仿炎;吴惠姗;李义良 | 申请（专利权）人： | 广东省林业科学研究院;台山市红岭种子园 |
| 主分类号： | A01H4/00 | 分类号： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 44224 广州华进联合专利商标代理有限公司 | 代理人： | 曾银凤;万志香 |
| 地址： | 510520 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种湿加松体细胞胚拯救的方法，包括(1)采集湿加松球果、获取外植体；(2)诱导产生胚性愈伤组织；(3)胚性愈伤组织的增殖；(4)熟化培养获得具有萌发潜力的子叶胚；(5)萌发培养获得萌发苗的步骤；所述采集湿加松球果的时间为6月20日‑7月2日；所述诱导培养基中的激素组分包括：2‑2.4μM的6‑苄氨基嘌呤、0.008‑0.012μM的芸苔素内酯、7‑7.4μM的2，4‑D丁酯。该方法具有较高的胚性愈伤组织的诱导率、体胚成熟率以及萌发率。 | ||
| 搜索关键词： | 湿加松 体细胞 拯救 方法 | ||
【主权项】：
1.一种湿加松体细胞胚拯救的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n（1）获取外植体：采集湿加松球果，剥出种子，将种子消毒后分离出包含合子胚和胚乳的外植体；所述采集湿加松球果的时间为6月20日-7月2日；/n（2）诱导：将所述外植体转移到装有诱导培养基的培养器皿中进行诱导培养，获得胚性愈伤组织；/n（3）增殖：将步骤（2）所获得的胚性愈伤组织转移到装有增殖培养基的培养器皿中进行增殖培养，获得增殖胚；/n（4）熟化：将步骤（3）所获得的增殖胚转移到装有熟化培养基的培养器皿中进行熟化培养，获得具有萌发潜力的子叶胚；/n（5）萌发：将步骤（4）所获得的具有萌发潜力的子叶胚接种到装有萌发培养基的培养器皿中进行萌发培养，获得萌发苗；/n所述诱导培养基包括以下组分：4.4-5.2mM的硝酸铵、9.2-9.8mM的硝酸钾、1.1-1.5mM的磷酸二氢钾、0.05-0.09mM的二水合氯化钙、3.6-4.0mM的七水合硫酸镁、3-3.2mM的L-谷氨酰胺、58-59mM的蔗糖、0.54-0.58mM的肌醇、501.4-501.8μM的硼酸、124-124.6μM的一水合硫酸锰、149-150μM的七水合硫酸锌、24.8-25.2μM的碘化钾、1.8-2.2μM的五水硫酸酮、0.4-0.6μM的六水合氯化钴、4-6μM的二水合钼酸钠、39-41μM的七水合硫酸亚铁、39.8-40.3μM的EDTA-二钠、0.2-0.4μM的盐酸硫胺素、0.4-0.6μM的盐酸吡哆醇、3.9-4.3μM的烟酸、2-2.4 μM 的6-苄氨基嘌呤、0.008-0.012μM的芸苔素内酯、7-7.4μM的2，4-D丁酯、0.9-1.1g/L的水解酪蛋白、1.8-2.2g/L的植物凝胶；/n所述增殖培养基包括以下组分：4.4-5.2mM的硝酸铵、9.2-9.8mM的硝酸钾、1.1-1.5mM的磷酸二氢钾、0.05-0.09的二水合氯化钙、3.6-4.0mM的七水合硫酸镁、3-3.2mM的L-谷氨酰胺、58-59mM的蔗糖、0.54-0.58mM的肌醇、501.4-501.8μM的硼酸、124-124.6μM的一水合硫酸锰、149-150μM的七水合硫酸锌、24.8-25.2μM的碘化钾、1.8-2.2μM的五水硫酸酮、0.4-0.6μM的六水合氯化钴、4-6μM的二水合钼酸钠、39-41μM的七水合硫酸亚铁、39.8-40.3μM的EDTA-二钠、0.2-0.4μM的盐酸硫胺素、0.4-0.6μM的盐酸吡哆醇、3.9-4.3μM的烟酸、2-2.4 μM的 6-苄氨基嘌呤、0.008-0.012μM的芸苔素内酯、7-7.4μM的2，4-D丁酯、0.9-1.1g/L的水解酪蛋白、1.8-2.2g/L的植物凝胶；/n所述熟化培养基包括以下组分：4.4-5.2mM的硝酸铵、9.2-9.8mM的硝酸钾、1.1-1.5mM的磷酸二氢钾、0.05-0.09mM二水合氯化钙、3.6-4.0mM的七水合硫酸镁、3-3.2mM的L-谷氨酰胺、175-175.4mM的蔗糖、0.54-0.58mM的肌醇、501.4-501.8μM的硼酸、124-124.6μM的一水合硫酸锰、149-150μM的七水合硫酸锌、24.8-25.2μM的碘化钾、1.8-2.2μM的五水硫酸酮、0.4-0.6μM的六水合氯化钴、4-6μM的二水合钼酸钠、39-41μM的七水合硫酸亚铁、39.8-40.3μM的EDTA-二钠、0.2-0.4μM的盐酸硫胺素、0.4-0.6μM的盐酸吡哆醇、3.9-4.3μM的烟酸、2-2.4 μM的 6-苄氨基嘌呤、18.7-19.1μM的脱落酸、0.9-1.1g/L的水解酪蛋白、4.8-5.2g/L的植物凝胶；/n所述萌发培养基包括以下组分：4.4-5.2mM的硝酸铵、9.2-9.8mM的硝酸钾、1.1-1.5mM的磷酸二氢钾、0.05-0.09mM的二水合氯化钙、3.6-4.0mM的七水合硫酸镁、58-59mM的蔗糖、0.54-0.58mM的肌醇、501.4-501.8μM的硼酸、124-124.6μM的一水合硫酸锰、149-150μM的七水合硫酸锌、24.8-25.2μM的碘化钾、1.8-2.2μM的五水硫酸酮、0.4-0.6μM的六水合氯化钴、4-6μM的二水合钼酸钠、39-41μM的七水合硫酸亚铁、39.8-40.3μM的EDTA-二钠、0.2-0.4μM的盐酸硫胺素、0.4-0.6μM的盐酸吡哆醇、3.9-4.3μM的烟酸、2.8-3.2g/L的植物凝胶。/n
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