[发明专利]一种降血糖提取物的检测方法

摘要

本技术方案公开了一种降血糖提取物的检测方法，所述降血糖提取物是按如下方法制备的：以毛麻楝叶、小黄皮叶、香椿叶为原料，提取，分离，纯化，即得含有小黄皮素B、新贝格木素A、血见愁苷A、山楝体F的降血糖提取物，其检测方法为，采用硅胶G薄层板检测，可见4个特征斑点,HPLC检测，可见4个特征色谱峰。

主权项

1.一种降血糖提取物的检测方法，其特征在于所述的降血糖提取物的制备方法为:（1）取毛麻楝叶1重量份、小黄皮叶1重量份、香椿叶1重量份，混匀，粉碎，过20目筛，用环己烷为溶剂，60℃提取3次，每次提取时间为2.5小时，每次溶剂用量为毛麻楝叶、小黄皮叶及香椿叶总重量的12倍，滤过，合并环己烷提取液，减压回收环己烷，浓缩干燥得粗提物A，环己烷提取后的药渣备用；（2）将步骤（1）环己烷提取后的药渣，用体积比1:5的甲酸乙酯-甲醇混合溶剂提取，75℃提取4次，每次提取时间为3.5小时，每次溶剂用量为毛麻楝叶、小黄皮叶及香椿叶总重量的15倍，滤过，合并甲酸乙酯-甲醇提取液，减压回收溶剂，浓缩干燥得粗提物B，甲酸乙酯-甲醇提取后的药渣备用；（3）将步骤（2）甲酸乙酯-甲醇提取后的药渣，用体积比4:6的水-乙醇混合溶剂提取，50℃提取7次，每次提取时间为3小时，每次溶剂用量为毛麻楝叶、小黄皮叶及香椿叶总重量的15倍，滤过，合并水-乙醇提取液，减压回收溶剂，浓缩干燥得粗提物C，水-乙醇提取后的药渣备用；（4）将步骤（3）水-乙醇提取后的药渣，用水提取，80℃提取2次，每次提取时间为1小时，每次溶剂用量为毛麻楝叶、小黄皮叶及香椿叶总重量的8倍，滤过，合并水提取液，减压浓缩至浸膏，干燥得粗提物D；（5）将步骤（2）得到的粗提物B，经过重量份数比2:1混合均匀的MCI 凝胶-聚酰胺混合色谱柱，先用体积比3:97的甲醇-水洗脱，洗脱量为5个色谱柱体积，再用体积比20:80的甲醇-水洗脱，洗脱量为12个色谱柱体积，收集体积比20:80的甲醇-水洗脱液合并，回收溶剂，干燥得提取物E；（6）将步骤（3）得到的粗提物C，经过重量份数比1:2混合均匀的S8大孔吸附树脂-NKA9大孔吸附树脂混合树脂柱，先用体积比9:91的乙醇-水洗脱，洗脱量为4个树脂柱体积，再用体积比50:50的乙醇-水洗脱，洗脱量为2个树脂柱体积，收集体积比50:50的乙醇-水洗脱液合并，回收溶剂，干燥得提取物F；（7）按重量比2:3将步骤（5）得到的提取物E与步骤（6）得到的提取物F混匀，即得降血糖提取物；按如下方法检测：取降血糖提取物50mg，加体积比3:4的醋酸乙酯-二氯甲烷混合溶液50ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇10ml使溶解，作为供试品溶液；另取毛麻楝叶、小黄皮叶、香椿叶对照药材各1g，混匀，粉碎过80目筛，同法制成对照药材溶液；吸取上述两种溶液各3µl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比7:3:1.5:1:5的正己烷－丙酮－醋酸甲酯－甲醇-水的上层溶剂为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸试液，105℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显4个相同颜色的斑点；取降血糖提取物50mg，加体积比6:5的醋酸乙酯-甲醇混合溶液50ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇10ml使溶解，作为供试品溶液；另取毛麻楝叶、小黄皮叶、香椿叶对照药材各1g，混匀，粉碎过80目筛，同法制成对照药材溶液；吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比5:3:0.4:0.2的醋酸乙酯-二氯甲烷－丙酮-甲醇为展开剂，展开，展距18cm，取出，晾干，喷以体积比1:2:95的二甲氨基卞亚基罗丹宁：硫酸：乙醇试液， 128℃烘至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显4个相同颜色的斑点；取降血糖提取物50mg，加体积比7:5的二氯甲烷混-甲醇混合溶液50ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇10ml使溶解，作为供试品溶液；另取毛麻楝叶、小黄皮叶、香椿叶对照药材各1g，混匀，粉碎过80目筛，同法制成对照药材溶液；吸取上述两种溶液各20µl，注入高效液相色谱仪，测定，HPLC检测条件：紫外检测器，色谱柱为C18柱,流动相为体积比16:38:32的乙腈：甲醇：0.03mol/L磷酸盐缓冲液，流速1.5ml/min,柱温20℃，检测波长为212nm；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，出现4个相同保留时间的色谱峰。