[发明专利]一种高效表达重组鸡α干扰素的工程菌

摘要

本发明公开了一种高效表达重组鸡α干扰素的工程菌，其获得包括以下步骤：S1、根据大肠杆菌密码子的偏好性对Genebank中发表的鸡α干扰素基因序列进行密码子优化合成；S2、根据优化后的鸡α干扰素基因，设计特异性引物；S3、将鸡α干扰素基因PCR扩增；PCR产物经EcoRI、HindIII双酶切克隆到原核表达载体pET‑41a；S4、将测序正确的pET‑41a‑ChIFN‑α重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞；S5、重组鸡α干扰素的原核表达及抗病毒活性测定。本发明公开的工程菌可以实现鸡α干扰素的高效表达，获得的鸡α干扰素抗病毒活性达到1.71×107UI/mg。

主权项

1.一种高效表达重组鸡α干扰素的工程菌，其特征在于，通过以下步骤获得：S1、根据大肠杆菌密码子的偏好性对Genebank中发表的鸡α干扰素基因序列进行密码子优化，人工合成该鸡α干扰素基因；S2、根据密码子优化后的鸡α干扰素基因，设计一对特异性的引物：ChIFN‑α‑F：AATGCGGAATTCATGTGCAACCATCTGCGCCCChIFN‑α‑R：AATGCGAAGCTTCTAGGTGCGGGTGTTGCCGGS3、以人工合成的鸡α干扰素基因为模板，以含EcoRI酶切位点的ChIFN‑α‑F和含HindIII酶切位点ChIFN‑α‑R为引物，将鸡α干扰素基因PCR扩增；PCR产物经EcoRI、HindIII双酶切克隆到原核表达载体pET‑41a，经PCR鉴定正确的重组阳性质粒送测序；S4、将测序正确的pET‑41a‑ChIFN‑α重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞，经卡那霉素抗性平板筛选、EcoRI、HindIII 双酶切鉴定，进一步验证该重组阳性质粒；S5、重组鸡α干扰素的原核表达及抗病毒活性测定。