[发明专利]一种固相聚合蛋白质的方法

摘要

本发明提出一种固相聚合蛋白质的方法，聚合度高，分子量分布较窄，聚合蛋白混合物中几乎不含有未聚合的蛋白质。该方法包括以下步骤：首先将固相吸附介质与蛋白质混合，所述固相吸附介质为阴离子交换树脂或阳离子交换树脂；待蛋白质被吸附于固相吸附介质上后，洗涤去除未吸附于固相吸附介质上的蛋白质，然后加入多醛基分子与蛋白质进行交联，再加入蛋白质进行聚合；聚合完成后，加入还原剂将希夫氏碱的双键还原成稳定的单键，洗涤去除其他反应物，得到聚合蛋白混合物。 1

主权项

1.一种固相聚合蛋白质的方法，其特征在于，包括以下步骤：首先将固相吸附介质与蛋白质混合，所述固相吸附介质为阴离子交换树脂或阳离子交换树脂；待蛋白质被吸附于固相吸附介质上后，洗涤去除未吸附于固相吸附介质上的蛋白质，然后加入多醛基分子与蛋白质进行交联，再加入蛋白质进行聚合；聚合完成后，加入还原剂将希夫氏碱的双键还原成稳定的单键，洗涤去除其他反应物，得到聚合蛋白混合物。

2.根据权利要求1所述的固相聚合蛋白质的方法，其特征在于：在固相吸附介质与蛋白质混合前，先进行：

步骤1)固相吸附介质的预处理：在固相吸附介质加入所述多醛基分子，多醛基分子与固相吸附介质上可能的与醛基能够起反应的基团进行反应，然后加入所述还原剂继续反应，对还原生成的产物以及多余的多醛基分子离心并弃掉上清，用缓冲液重复洗涤至干净；

步骤2)多醛基分子溶液的预处理：将多醛基分子溶液与多醇羟基分子溶液按照摩尔比1:40‑1:100的比例进行混合，加入酸进行催化，使溶液pH为4‑7，反应温度为0—40℃。

3.根据权利要求2所述的固相聚合蛋白质的方法，其特征在于：

步骤1)中，加入的多醛基分子的浓度为0.01M‑0.5M；固相吸附介质与多醛基分子溶液的体积比为1:2‑1:30，还原剂加入的量为多醛基分子溶液体积的1.5倍至50倍；反应0.5小时以上；

步骤2)中，加入的酸为硫酸、盐酸或磷酸，反应时间为40min以上。

4.根据权利要求1所述的固相聚合蛋白质的方法，其特征在于：固相吸附介质与蛋白质混合进行吸附以及后续的聚合过程具体为：

步骤3)第一次聚合：将蛋白质pH调至高于或低于其等电点0.5‑3个单位，然后加入离子交换树脂中进行吸附，蛋白质pH高于其等电点则选用阴离子交换树脂，蛋白质pH低于其等电点则选用阳离子交换树脂；待吸附完成后，离心去上清，重复洗涤3次以上；然后加入预处理后的多醛基分子进行聚合反应，按照多醛基分子与介质的体积比为1:15‑1:50添加，反应温度为0‑40℃，反应时间1h以上，离心洗涤未反应的多醛基分子，重复三次以上；

步骤4)第二次聚合：加入蛋白质，此时加入的蛋白的量是首次加入的0.5倍以上，反应时间为1h以上；离心洗涤未反应的多醛基分子，重复三次以上。

5.根据权利要求1所述的固相聚合蛋白质的方法，其特征在于：在步骤4)之后，还进行步骤5)还原及洗脱：加入还原剂终止反应，还原剂的量是多醛基分子溶液体积的1.5倍至30倍，反应0.5小时以上，离心洗涤，弃上清，洗去多余还原剂，最后用0.5M NaCl将聚合后的蛋白洗脱下来并收集。

6.根据权利要求1所述的固相聚合蛋白质的方法，其特征在于：所述还原剂为硼氢化钠或二甲基胺硼烷。