[发明专利]一种胎盘组织冻存、复苏和制备间充质干细胞的方法

摘要

发明涉及一种胎盘组织冻存、复苏和制备间充质干细胞的方法，其包括如下步骤：对胎盘组织进行清洗；从组织剪下胎盘小叶，并用粉碎机粉碎；配制胎盘组织低温保护液备用；将粉碎后的组织与保护液混合后分装至冻存管中，先后在4℃下冷藏0.5小时，‑20℃冷藏2小时，‑80℃下冷冻1天，最后液氮中冷冻备用；需要时将胎盘组织冻存管从液氮中取出，恒温水浴解冻；使用缓冲液清洗后，双酶法消化胎盘组织；过滤收集细胞，使用间充质干细胞培养基培养与扩增间充质干细胞。本发明方法可有效冻存与复苏胎盘组织，制备间充质干细胞。

主权项

1.一种胎盘组织冻存、复苏和制备间充质干细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)通过PBS缓冲液清洗胎盘组织，使胎盘组织表面残留血液冲洗干净，胎盘表面无血液凝块；(2)使用组织剪剪下步骤(1)得到的胎盘组织的胎盘小叶，然后使用粉粹机将胎盘小叶粉粹成小块组织；(3)将步骤(2)获得的小块组织，按照1:1体积比加入预冷保护剂，混合均匀，分装至多个冻存管中，所述保护剂为玻璃化溶液与间充质干细胞培养基的混合液；(4)将步骤(3)获得的冻存管先后在4℃下冷藏0.5小时，‑20℃冷藏2小时，‑80℃下冷冻1天，最后在‑196℃液氮中冷冻备用；(5)需要时将步骤(4)冷冻的组织块从液氮中取出，在恒温水浴中解冻，用移液管吸取解冻的组织块，放入洁净的离心管中，加入PBS缓冲液混匀，然后离心，去掉上清液；(6)在步骤(5)清洗后的组织块中，先后加入0.1％II型胶原酶和0.25％胰酶进行消化，使用筛网过滤收集细胞溶液，然后离心，去掉上清液；(7)使用间充质干细胞培养基重悬步骤(6)获得的细胞沉淀，放入预先置有间充质干细胞培养基的培养瓶中，置于CO2培养箱内培养；以及(8)在培养后的3‑4天进行第一次换液，以后3‑4天换一次液，待细胞融合度达到70％以上后，使用胰蛋白酶进行消化后传代，即获得胎盘间充质干细胞。