[发明专利]不同组织中杉木内参基因的筛选方法和筛选基因作为内参基因的应用

摘要

本发明提供了不同组织中杉木内参基因的筛选方法和内参基因的应用，属于荧光定量PCR检测领域。所述筛选方法以甘油醛三磷酸脱氢酶基因、转录延伸因子、18S rRNA、28S rRNA和泛素基因为候选内参基因，以候选内参基因为模板设计引物；提取杉木苗的根、茎、叶组织的总RNA，以总RNA为模板合成cDNA；将cDNA为模板进行qPCR扩增，得到Ct值和相对表达量Q；根据相对表达量Q值和Ct值采用多个软件对候选内参基因进行稳定性评价；将候选内参基因的稳定性由强到弱排序，选择排序前两位的候选基因作为杉木的内参基因。筛选得到的18S rRNA和/或泛素基因作为杉木不同组织中的内参基因的应用。

主权项

1.不同组织中杉木内参基因的筛选方法，包括以下步骤：1)根据候选内参基因的核苷酸序列设计引物，得到特异性扩增候选内参基因的引物；所述候选内参基因分别是甘油醛三磷酸脱氢酶编码基因、转录延伸因子、18S rRNA、28S rRNA和泛素编码基因；所述甘油醛三磷酸脱氢酶编码基因具有如序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；所述转录延伸因子具有如序列表中SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；所述18S rRNA具有如序列表中SEQ ID No.3所示的核苷酸序列；所述28S rRNA具有如序列表中SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；所述泛素编码基因具有如序列表中SEQ ID No.5所示的核苷酸序列；2)提取杉木苗的根、茎、叶组织的总RNA，以总RNA为模板合成cDNA；3)将所述步骤2)中cDNA为模板，采用所述步骤1)中引物进行qPCR扩增，得到Ct值和相对表达量Q；所述相对表达量Q按照式I计算得到；Q＝2-△△Ct 式I4)根据所述步骤3)中相对表达量Q值，采用geNorm和Normfinder软件对所述候选内参基因进行稳定性评价；5)根据所述步骤3)中Ct值，采用BestKeeper软件对候选内参基因进行稳定性评价；6)根据geNorm软件、Normfinder软件和BestKeeper软件做出的稳定性评价结果，将所述候选内参基因按照稳定性由强到弱进行排序，选择综合排序至少前两位的候选基因作为杉木的内参基因；所述步骤1)和步骤2)之间没有时间顺序的限制，所述步骤4)和步骤5)之间没有时间顺序的限制。