[发明专利]农杆菌EHA105介导地细基江蓠繁枝变种转基因方法有效
| 申请号： | 201711465054.5 | 申请日： | 2017-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN108179153B | 公开（公告）日： | 2021-01-01 |
| 发明（设计）人： | 王克坚;何艺宾;彭会 | 申请（专利权）人： | 厦门大学 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/65;A01H1/06;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/00 |
| 代理公司： | 厦门南强之路专利事务所(普通合伙) 35200 | 代理人： | 马应森 |
| 地址： | 361005 *** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 农杆菌EHA105介导地细基江蓠繁枝变种转基因方法，涉及细基江蓠繁枝变种转基因的方法。将长外植体培养于含茉莉酸甲酯、激动素、2,4‑D和卡那霉素的MES培养基中诱导愈伤组织，培养后，观察并统计愈伤的诱导率；用接菌环挑取农杆菌EHA105，接种在LB液体培养基中培养，隔天按质量百分比1％～2％接种到新鲜的LB培养基中，振荡培养，进行二次活化；当OD600为0.4～0.5时，收集菌液于无菌离心管中，离心，去上清，用无菌海水重悬，得重悬农杆菌菌液；将获得的愈伤组织接种到重悬农杆菌菌液中培养后，愈伤组织用含羧苄青霉素、卡那霉素的无菌海水清洗后，于荧光显微镜中观察GFP报告基因的表达情况及绿色荧光。 | ||
| 搜索关键词： | 杆菌 eha105 江蓠 变种 转基因 方法 | ||
【主权项】：
1.农杆菌EHA105介导地细基江蓠繁枝变种转基因方法，其特征在于包括以下步骤：1)将长外植体培养于含茉莉酸甲酯、激动素、2,4‑D和卡那霉素的MES培养基中诱导愈伤组织，培养后，观察并统计愈伤的诱导率；2)用接菌环挑取农杆菌EHA105，接种在LB液体培养基中培养，隔天按质量百分比1％～2％接种到新鲜的LB培养基中，振荡培养，进行二次活化；当OD600为0.4～0.5时，收集菌液于无菌离心管中，离心，去上清，用无菌海水重悬，得重悬农杆菌菌液；3)将步骤1)获得的愈伤组织接种到步骤2)中的重悬农杆菌菌液中培养后，愈伤组织用含羧苄青霉素、卡那霉素的无菌海水清洗后，于荧光显微镜中观察GFP报告基因的表达情况及绿色荧光。
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